[發明專利]一種大黃藥材的檢測方法

在審

• 申請號: 201410375520.0
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN104374847A
• 公開（公告）日: 2015-02-25
• 發明（設計）人: 李士博;韓斌;陳杰;李登鵬;李波;宋平順;趙建邦;何祿仁;楊錫;楊靜
• 申請（專利權）人: 甘肅中天藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 趙敏

1.一種大黃藥材的檢測方法，其特征在于，該檢測方法包括如下有效成分的鑒別及含量測定步驟以及農藥殘留量檢測的步驟，其中，

A、土大黃苷的鑒別包括以下步驟：

(1)取土大黃苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.3mg土大黃苷的溶液，作為對照品溶液；

(2)另取待測藥材粉末0.5g，加甲醇15mL，加熱回流、放冷并濾過，濾液作為供試品溶液；

(3)照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比100：30：2：3的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；

B、沒食子酸和兒茶素的含量測定包括以下步驟：

(1)精密稱取沒食子酸與兒茶素對照品適量，用50％甲醇溶解，制成含沒食子酸0.106mg/mL與兒茶素0.115mg/mL的混合對照；

(2)精密稱取待測藥材細粉0.5g，置錐形瓶中，精密加入25mL20％甲醇溶液，超聲40分鐘，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試溶液；

(3)照高效液相色譜法試驗，以waters?C18柱為色譜柱，以甲醇為流動相A，以體積濃度0.1％的磷酸為流動相B，控制流速1mL/分鐘進行梯度洗脫，具體梯度洗脫程序如下：從0-10分鐘，流動相A：流動相B的體積比為8％：92％；從10-30分鐘，流動相A：流動相B的體積比由8％：92％→30％：70％；從30-35分鐘，流動相A：流動相B的體積比由30％：70％→40％：60％；從35-40分鐘，流動相A：流動相B的體積比由40％：60％→8％：92％；從40-50分鐘，流動相A：流動相B的體積比為8％：92％；

精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入高效液相色譜儀，于280nm波長下測定；

C、農藥殘留量檢測包括以下步驟：

(1)精密稱取三苯基磷酸酯適量，加丙酮制成每1mL含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作為內標貯備液；

分別精密量取各農藥對照品貯備溶液1mL及所述內標貯備液1mL，加丙酮定容至100mL，作為混合對照品貯備溶液；分別精密量取適量，加乙腈定容制成20-1000ng/mL的不同濃度的溶液，作為混合對照品溶液；

另取核糖酸內酯適量，加乙腈溶解制成每1mL含20mg核糖酸內酯的溶液，另取山梨醇適量，加水溶解制成每1mL含山梨醇10mg的溶液；分別精密量取上述核糖酸內酯、山梨醇溶液各1mL混勻，加乙腈定容至10mL，作為分析保護劑；

(2)精密稱取待測藥材細粉10g，并加入氯化鈉1g混勻，精密加入丙酮100mL，冰浴超聲處理30分鐘，離心，將上清液迅速移入裝有1g無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30分鐘；隨后精密量取上述溶液60mL減壓濃縮至近干，并加入體積比為1：1的環已烷-乙酸乙酯溶液溶解樣品并定容至10mL，過濾后取濾液經GPC凝膠滲透色譜凈化，以體積比為1：1的環已烷-乙酸乙酯溶液為流動相洗脫，收集洗脫液，移入KD瓶中，減壓濃縮至近干；

向上述樣品中加入體積比為1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5mL溶解，并轉移至石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以體積比為1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15mL洗脫，收集洗脫液，氮吹至近干，隨后加入所述內標貯備液5μL，加乙腈定容至1mL，作為供試品溶液；

(3)精密量取上述各濃度混合對照品溶液及供試品溶液各400μL，并分別加入所述分析保護劑100μL混勻，隨后分別精密吸取1μL，進行氣相色譜-質譜聯用儀測定；其中，

所述氣相色譜分析條件為：取規格為30m×0.25mm×0.25um的彈性石英毛細管柱DB17ms，以高純氦氣為載氣，柱流速1.3mL/分鐘，進樣量1μL，采用高壓不分流進樣，設置進樣口溫度為230℃，升溫程序具體為：初始溫度60℃，以30℃/分鐘升至120℃、以10℃/分鐘升至200℃、以2℃/分鐘升至230℃、以30℃/分鐘升至300℃，并保持7分鐘；

所述EI源質譜測定的條件為：設置電子能量70eV，離子源溫度230℃，接口溫度250℃。

2.根據權利要求1所述的大黃藥材的檢測方法，其特征在于，所述農藥殘留量檢測中，所述GPC凝膠滲透色譜凈化步驟的條件具體為：填料為Bio-Beads?S-X3200-400目，凈化柱為2.5mm×40cm，具體洗脫參數為凈化去雜900s，目標物收集1200s，柱子清洗300s。