[發明專利]一種光電化學三維紙芯片的制備及其在腫瘤檢測中的應用

有效

• 申請號: 201410372677.8
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN104122393A
• 公開（公告）日: 2014-10-29
• 發明（設計）人: 于京華;李麗;顏梅;葛慎光;張彥;吳魯丹;孫國強;吳開慶
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N27/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種光電化學三維紙芯片的制備及其在腫瘤檢測中的應用，其特征是包括以下步驟：

1.1?在計算機上設計如附圖1所示的光電化學三維微流控紙芯片的疏水蠟批量打印圖案，放大后的樣式如附圖2所示；

1.2?將紙剪裁成常用A4大小的紙，將步驟（1.1）中設計的疏水蠟批量打印圖案打印到A4紙上，隨后將帶有蠟圖案的A4紙放置到平板加熱器或烘箱中，在150?oC加熱2?min；使蠟融化并浸透整個紙的厚度，形成疏水墻；

1.3?采用絲網印刷的方法，將陣列工作電極、參比電極、對電極印刷圖案依次印刷到步驟（1.2）中得到的紙上，最后所得的樣式如附圖3所示，其中左側為工作區，上面印刷有6個工作電極，右側為參比區，上面印有參比電極和對電極；

1.4?對（1.3）中親水區域功能化，將抗體固定在親水區域，隨后用牛血清白蛋白封鎖活性位點；

1.5將目標物或血清試樣在固定抗體的反應區域孵育；

1.6將經（1.5）處理后的紙芯片折疊，將含有抗壞血酸的磷酸緩沖液滴加到印有參比電極對電極的紙層上，在紫外燈的照射下，連接電化學設備進行測試。

2.根據權利要求書所述光電化學三維微流控紙芯片的制備及其在多腫瘤標記物現場即時檢測中的應用，其特征在于該方法的具體步驟為：

2.1?在計算機上用Adobe?illustrator?CS4設計光電化學三維微流控紙芯片的疏水蠟批量打印圖案；

2.2?將紙剪裁成常用A4大小的紙，利用蠟打印技術在紙上打印蠟疏水圖案，將打印蠟的圖案在恒溫150?oC下2?min，使蠟融化并浸透整個紙的厚度，形成疏水墻沒有打印蠟的部分為親水區即為工作區；

2.3?采用絲網印刷技術、石墨為原料，取等體積的丙酮和環己酮溶液，再加入對應量的乙酸纖維素，使用超聲波超聲使乙酸纖維素充分的溶解在丙酮和環己酮的混合溶劑中，最后加入一定量的石墨粉，用玻璃棒充分混勻，在紙上印制6個工作電極，一個碳對電極和Ag/AgCl參比電極；

2.4?將（2.3）所得的紙進行功能化，制備工作區

制備Pt納米粒子：稱取170?mg的聚乙烯吡咯烷酮加入到5?mL?1mM?H₂PtCl₆，將此溶液用去離子水稀釋到58?mL，在磁力攪拌下加入新配置的2?mL?1%的NaBH₄，繼續磁力攪拌3?h；在紙上生長納米多孔Pt粒子：量取15?μL制備的Pt納米粒子，滴加到（2）上印有工作電極的反面工作區上，室溫下孵育1?h，目的是使Pt納米粒子牢固的吸附在紙纖維上，去離子水沖洗3次以移除未成功附著的Pt納米粒子，將長有Pt種子的紙片放于燒杯中，隨后將10?mL的多孔Pt的生長溶液，此生長溶液包含0.5?mM的H₂PtCl₆和0.01?mM的抗壞血酸，加入到燒杯中，60?oC水浴加熱20?min，取出紙芯片，室溫下自然干燥；在生長有納米多孔Pt粒子的紙芯片上水熱法生長ZnO納米棒：將長有納米多孔Pt粒子的紙芯片放于勻膠機上，向此紙芯片上滴加40?mM的Zn(CH₃COO)₂·2H₂O，以1000?rpm的速度旋涂60?s，取出紙片放于恒溫干燥箱中干燥150?oC干燥10?min，將旋涂和加熱干燥的步驟重復6次，即可獲得附著有ZnO種子且生長有納米多孔Pt粒子的紙芯片；隨后將此紙芯片放于25?mM?Zn(NO₃)₂·6H₂O與25?mM六次甲基四胺的水溶液中，90?oC加熱6?h即可；在ZnO納米棒上生長CdS量子點：將上述生長有ZnO納米棒的紙芯片放于10?mM的Cd(NO₃)₂和10?mM硫代乙酰胺中，室溫下反應60?min，取出紙芯片，去離子水沖洗4次后干燥；將5?μL抗體固定在經上述功能化的紙芯片上的親水區域，室溫下干燥，隨后用5?μL?1%的牛血清白蛋白掩蔽活性位點，室溫下孵育50?min；

2.5將目標抗原或血清樣品滴加到反應區，室溫下孵化50?min；

2.6將紙芯片折疊，將40?μL含有抗壞血酸的、pH等于7.4的磷酸緩沖液，滴加到印有參比電極對電極的紙層上，在紫外燈的照射下，連接電化學設備進行測試，其中抗壞血酸和磷酸緩沖液的濃度均為0.1mol·L^-1。

3.?根據權利要求1所述絲網印刷電極所用的紙材料為一級色譜紙。