[發(fā)明專利]克倫特羅適配體與檢測(cè)克倫特羅的適配體電化學(xué)生物傳感器

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410369878.2
• 申請(qǐng)日: 2014-07-30
• 公開（公告）號(hào): CN104109677B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉大嶺;陳丹;姚冬生;謝春芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/115
• 分類號(hào): C12N15/115;G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司44202
• 代理人: 劉宇峰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種克倫特羅適配體以及檢測(cè)克倫特羅的適配體電化學(xué)生物傳感器，以及該傳感器的制備方法與檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

克倫特羅(Clenbuterol,CLB)，化學(xué)命名為Α-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇鹽酸鹽，分子量為277.19，分子式C₁₂H₁₈Cl₂N2O，是一種人工合成的化學(xué)物質(zhì)，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

克倫特羅理化性質(zhì)穩(wěn)定，在較高溫度下不易分解，動(dòng)物攝入后主要以原藥形式殘留在肌肉組織和內(nèi)臟器官中。殘留在畜禽產(chǎn)品中的克倫特羅，通過食物鏈在人體內(nèi)富集。研究表明，長(zhǎng)期食用殘留克倫特羅的食品后，會(huì)出現(xiàn)頭痛、胸悶、心悸、肌肉震顫、四肢麻木等不良反應(yīng)，嚴(yán)重者甚至危及生命。中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告明確規(guī)定克倫特羅及其鹽、酯在動(dòng)物性食品中不得檢出。

目前常用的克倫特羅殘留檢測(cè)方法有高效液相色譜法，液-質(zhì)聯(lián)用法，氣-質(zhì)聯(lián)用法，酶聯(lián)免疫法，電化學(xué)免疫傳感器等。盡管這些方法有很高的選擇性和敏感性，但需要昂貴的儀器或者長(zhǎng)時(shí)間的樣品預(yù)處理以及復(fù)雜的測(cè)試流程。因此，建立一種快速、靈敏、低成本的克倫特羅檢測(cè)技術(shù)具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種可用于克倫特羅含量快速檢測(cè)的生物傳感器及其組裝方法。該生物傳感器靈敏度更高，響應(yīng)時(shí)間更快，并且可快速用于克倫特羅檢測(cè)。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種克倫特羅適配體。

本發(fā)明所述的克倫特羅適配體為含有GGATATTGG序列、長(zhǎng)度為13-18個(gè)堿基的單鏈DNA探針，且3’端修飾了3’-NH₂-(CH₂)₇-。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種檢測(cè)克倫特羅的適配體電化學(xué)生物傳感器。

本發(fā)明所述的檢測(cè)克倫特羅的適配體電化學(xué)生物傳感器，含有本發(fā)明所述的克倫特羅適配體。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法。

本發(fā)明所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法，包括以下步驟：

(1)裸金電極表面的拋光及活化處理：將裸金電極用氧化鋁粉末打磨，用超純水超聲清洗去除氧化鋁粉末，將清洗好的裸金電極浸入新鮮配制的熱的Piranha溶液于20-25℃下活化10分鐘，得到活化的裸金電極；

(2)活化電極的適配體修飾：合成如本發(fā)明所述的適配體，配制100μmol/L的適配體溶液，加入到NaCl溶液中配制成2μmol/L適配體組裝液；將步驟(1)所得的活化的裸金電極浸入適配體組裝液中，4℃下組裝24小時(shí)，得到所述的適配體電化學(xué)生物傳感器。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種本發(fā)明所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的用途，即將本發(fā)明所述的適配體電化學(xué)生物傳感器用于克倫特羅的檢測(cè)。

本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種檢測(cè)克倫特羅的方法，該方法是基于本發(fā)明所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的檢測(cè)方法。

本發(fā)明所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的檢測(cè)克倫特羅的方法，包括以下步驟：

(1)對(duì)克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：

將所述的適配體電化學(xué)生物傳感器作為工作電極，Ag/AgCl(飽和KCl)電極作為參比電極，鉑絲電極作為對(duì)電極；

將所述的適配體電化學(xué)生物傳感器用超純水沖洗，去除未結(jié)合的適配體，然后置于濃度為5mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆]為1：1的含0.1mol/L?KCl的電解液中，進(jìn)行交流阻抗分析，初始電位為0.22V，頻率為0.1-1.0×10⁵Hz，得到適配體電化學(xué)生物傳感器的交流阻抗圖譜及其阻抗值Ret0；