[發明專利]芽孢保護劑、應用及微生物肥料中產芽孢菌含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201410369354.3
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN104152376B
• 公開（公告）日: 2017-04-05
• 發明（設計）人: 鄭錦華;陳劍;黃旭明;李慶紅;譚歡;袁新榮;蘇紅
• 申請（專利權）人: 湖南豫園生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/06;C12R1/07
• 代理公司: 長沙智嶸專利代理事務所43211
• 代理人: 黃子平

技術領域

本發明涉及微生物肥料檢測領域，特別地，涉及一種芽孢保護劑、應用及微生物肥料中產芽孢菌含量的檢測方法。

背景技術

現有技術中，對微生物肥料中活菌數的檢測一直沿用農業部的檢測標準。檢測方法為：將菌劑制品通過稀釋，將稀釋到一定濃度的菌液接入預先制備好的平板檢測培養基中，培養后，對培養基中的菌落數進行肉眼觀察計數，從而計算得出產品的含菌數。為了保證檢測的準確性，需根據肥料中所含菌種類，分別選擇對應的培養基進行培養。

對微生物肥料中各種以芽孢形式存在的細菌含量的檢測結果常出現較大偏差。這主要是因為檢測時各類芽孢菌的芽孢還未萌發，檢測出的總菌數中不含這些以芽孢形式存在的細菌的數量，從而降低了微生物肥料中實際的含菌量。

發明內容

本發明目的在于提供一種芽孢保護劑、應用及微生物肥料中產芽孢菌含量的檢測方法，以解決現有技術中微生物肥料中以芽孢形式存在的芽孢含量無法準確獲知的技術問題。

為實現上述目的，根據本發明的一個方面，提供了一種芽孢保護劑，包括氯化鈉濃度為8～10％的生理鹽水以及用量為生理鹽水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸。

進一步地，由氯化鈉濃度為8～10％的生理鹽水以及用量為生理鹽水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸組成。

進一步地，由氯化鈉濃度為8.5％的生理鹽水以及用量為生理鹽水用量4wt.％的聚天冬氨酸組成。

根據本發明的另一方面還提供了一種上述的芽孢保護劑在滅菌處理中的應用。

進一步地，包括以下步驟：將含芽孢萌發菌體的待處理物分散于芽孢保護劑中，得到菌懸液；在70～80℃下對菌懸液進行滅菌處理。

根據本發明的另一方面還提供了一種微生物肥料中產芽孢菌含量的檢測方法，包括以下步驟：1)將待檢測肥料分散于如上述的芽孢保護劑中，配置成菌懸液；2)對菌懸液在70～80℃下水浴15分鐘進行滅菌處理，得到滅菌懸液；3)將滅菌懸液接種至芽孢培養基中，培養后形成菌落，根據芽孢培養基上所形成菌落數量計數后，得出待檢測肥料的含菌量。

進一步地，芽孢培養基為由胰蛋白胨4.0～6.0g/L、酵母浸粉2.0～3.0g/L、葡萄糖0.5～1.5g/L、七水硫酸鎂0.2～1g/L、氯化鈉0.5～1.5g/L、碳酸鈣0.5～1.5g/L、磷酸氫二鉀2.0～3.0g/L、硫酸錳0.01g/L、TTC0.01g/L和瓊脂16～20g/L組成。

進一步地，芽孢培養基為由胰蛋白胨5.0g/L、酵母浸粉2.5g/L、葡萄糖1.0g/L、七水硫酸鎂0.5g/L、氯化鈉1.0g/L、碳酸鈣1.0g/L、磷酸氫二鉀2.5g/L、硫酸錳0.01g/L、TTC0.01g/L和瓊脂16g/L組成。

進一步地，菌懸液中還包括1～2滴/L分散劑。

進一步地，分散劑為吐溫或OP-10。

本發明具有以下有益效果：

本發明提供的芽孢桿菌保護劑能保護已經萌發的芽孢，使其70℃以內的滅菌溫度下仍能繼續在培養基中生長，從而保證了后續對微生物肥料中芽孢菌含量的檢測準確性。

除了上面所描述的目的、特征和優點之外，本發明還有其它的目的、特征和優點。下面將對本發明作進一步詳細的說明。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明進行詳細說明，但是本發明可以由權利要求限定和覆蓋的多種不同方式實施。

本發明提供的芽孢桿菌保護劑包括氯化鈉濃度為8～10％的生理鹽水以及用量為生理鹽水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸。

現有技術中聚天冬氨酸多被用作肥料增效劑，可以強化作物對N，P，K及微量元素的全面吸收，效果顯著，適用于多種作物和土壤。而本發明通過試驗發現將其用于分散含芽孢的待檢測樣品，能保護其中以及已經萌發的芽孢菌種，防止其在后續去除其他雜菌的加熱過程中失活，而無法在培養階段繼續生長，從而影響檢測所得含菌數的準確性。通過添加此比例的聚天冬氨酸后，能對分散于其中的待測物料中所含已經萌發的芽孢菌體起到保護作用。

聚天冬氨酸因含有肽鍵和羧基等活性基團的結構特點，具有極強的螯合、分散、吸附等作用，且配伍性極佳。具體的機理不得而知，猜測可能是由于聚天冬氨酸能附著于萌發后的芽孢菌體表面，阻擋高溫對菌體的損傷。作為70℃的萌發芽孢菌體保護劑十分的有效。生理鹽水有維持細胞正常滲透壓的作用，從而起到保護芽孢菌的作用。二者聯合使用起到對萌發芽孢菌體的保護作用。