[發(fā)明專利]蛋白激酶抑制劑在從非神經細胞制備神經細胞中的用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410367556.4
• 申請日: 2014-07-29
• 公開（公告）號: CN104195108A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設計）人: 魯曉華;楊佳銀;楊波
• 申請（專利權）人: 深圳市三啟生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N5/0793;A61K35/12;A61P25/28;A61P25/16;A61P25/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，具體地，涉及蛋白激酶抑制劑在從非神經細胞制備神經細胞中的用途，更具體地，涉及蛋白激酶抑制劑在從非神經細胞制備神經細胞中的用途、制備神經細胞的方法、用于制備神經細胞的試劑盒、試劑盒在從非神經細胞制備神經細胞中的用途、神經細胞或其衍生物、神經細胞或其衍生物在制備藥物中的用途。?

背景技術

中樞神經系統(tǒng)紊亂(CNS)疾病，包括老年癡呆癥(Alzheimer’s?Disease，AD)、帕金森病(Parkinsin’s?Disease，PD)、肌萎縮性脊髓側索硬化癥(Amyotrophic?Lateral?Sclerosis，ALS)、多發(fā)性硬化癥(Multiple?Sclerosis，MS)和腦白質營養(yǎng)不良(Leukodystrophies)等，在全世界范圍內，CNS疾病影響數(shù)百萬人的健康，而目前大部分CNS疾病仍沒有有效的治療方法。在非人靈長類動物和嚙齒動物中，神經細胞移植已經被證明是一種非常有前景的治療CNS疾病的方法。然而，細胞治療要求高質量且數(shù)量龐大的神經細胞，但神經細胞的來源有限。在過去的二十年，已有多種方法用于在體外制備神經細胞，包括從人胚胎干細胞(hESC)、誘導多能干細胞(hiPSC)和體細胞轉化獲得神經細胞。但目前將制備獲得的神經細胞用于細胞移植仍存在多種限制，例如，從hESC轉化獲得的神經細胞由于存在少量未轉化的hESC而存在致瘤危險，同時由于異體移植而存在免疫排斥問題，hiPSC雖然可以從特定患者獲得而減輕免疫排斥問題，但其和hESC一樣，存在安全性問題。?

最近，從體細胞直接轉化獲得神經細胞吸引了眾多研究者的注意。在2010年，Wernig研究組首先提出采用轉錄因子可以將纖維細胞直接轉化為神經細胞。隨后研究者證實了多種多樣的神經因子和微RNAs可以用于誘導纖維細胞-神經細胞轉化。最新的報道表明過表達轉錄因子可以誘導老鼠纖維細胞重編程為能產生髓鞘的少突膠質前體細胞(OPCs)。由此，在疾病模型和細胞治療的發(fā)展中，直接纖維細胞-OPCs轉化成為了一種可替換hESC/hiPSC技術的方法。直接纖維細胞-OPCs轉化具有以下優(yōu)點：不需要制備、擴增、分化多能細胞的時間，誘導獲得的有絲分裂后期的神經細胞具有較低的致瘤性和畸胎瘤形成可能。因而，直接從纖維細胞轉化獲得的神經細胞適合用于自體移植。然而，目前報道的從纖維細胞直接轉化神經細胞的方法中均需要使用轉錄因子，這將使得轉化周期較長，且安全性較差。?

因而，目前關于體外制備神經細胞的方法仍有待改善。?

發(fā)明內容

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種采用蛋白激酶抑制劑有效制備獲得安全性高、適于自體移植的神經細胞的手段。?

在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供了蛋白激酶抑制劑在從非神經細胞制備神經細胞中的用途。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，在存在蛋白激酶抑制劑時，不需要使用轉錄因子，非神經細胞即能夠有效轉化為神經細胞。?

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述蛋白激酶抑制劑為選自下列的至少一種：ROCK抑制劑、AKT抑制劑、PI3K抑制劑、FAK抑制劑以及免疫抑制劑。由此，能夠有效誘導非神經細胞轉化為神經細胞。?

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述蛋白激酶抑制劑為選自下列的至少一種：ROCK抑制劑Y27632、AKT/mTOR抑制劑Palomid?529、PI3K抑制劑LY294002、FAK抑制劑PF562271以及免疫抑制劑雷帕霉素。由此，能夠有效誘導非神經細胞轉化為神經細胞，且轉化率較高。?

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述神經細胞為選自少突膠質前體細胞、成熟少突膠質細胞、神經元細胞、神經膠質細胞的至少一種。由此，制備獲得的神經細胞能夠有效用于自體移植，治療中樞神經紊亂疾病以及脊髓損傷，且安全性高，不存在免疫排斥反應。?

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述非神經細胞為人類細胞，所述人類細胞為選自成纖維細胞、上皮細胞、成人細胞和新生兒細胞的至少一種。由此，在存在蛋白激酶抑制劑時，能夠快速有效地轉化為神經細胞。?

在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提供了一種制備神經細胞的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該方法包括：在存在蛋白激酶抑制劑時，對非神經細胞進行培養(yǎng)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明的該方法，不需要使用轉錄因子，即能夠快速有效地制備獲得神經細胞，且獲得的神經細胞適合用于自體移植，治療中樞神經紊亂疾病以及脊髓損傷，同時安全性高，不存在免疫排斥反應。?