[發(fā)明專(zhuān)利]一種消除皮膚妊娠紋的干細(xì)胞提取物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410365950.4
• 申請(qǐng)日: 2014-07-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105267243B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李靜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳培元生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K35/51
• 分類(lèi)號(hào): A61K35/51;A61K35/50;A61P39/06;A61K8/98;A61P17/00;A61Q19/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

本發(fā)明提供了一種用于消除皮膚妊娠紋的干細(xì)胞提取物，屬于干細(xì)胞技術(shù)領(lǐng)域，該干細(xì)胞提取物來(lái)源于正常胎盤(pán)或臍帶的干細(xì)胞，解決了從胚胎及臍帶中獲得干細(xì)胞及分離所需干細(xì)胞等技術(shù)問(wèn)題。該干細(xì)胞提取物含有大量有益于皮膚再生修復(fù)的生物活性因子，利用本干細(xì)胞提取物或以本干細(xì)胞提取物為主要成分制成的產(chǎn)品，能夠有效減輕甚至消除皮膚妊娠紋，且對(duì)皮膚無(wú)刺激等不良反應(yīng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及干細(xì)胞技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及干細(xì)胞提取物的制備方法和用途。

背景技術(shù)

妊娠紋(stretch marks)是婦女妊娠期出現(xiàn)在腹壁、大腿內(nèi)外側(cè)、臀部、后腰、胸部等部位皮膚的一些寬窄不同、長(zhǎng)短不一的粉紅色或紫紅色的波浪狀花紋；分娩后，這些花紋的顏色會(huì)逐漸消失，留下白色或銀白色的有光澤的瘢痕線(xiàn)紋。妊娠紋的形成主要是由于妊娠期激素的影響，加之腹部膨隆使皮膚的彈力纖維與膠原纖維損傷或斷裂，皮膚變薄變細(xì)。妊娠紋在初產(chǎn)婦尤為明顯，一旦出現(xiàn)多不會(huì)自然消失，并常伴隨皮膚松弛，影響婦女產(chǎn)后的體態(tài)和身心健康。

目前，妊娠紋缺少有效的去除方法。市場(chǎng)上有采用激光、精油和內(nèi)服藥物的方法，多因效果不夠顯著或伴有明顯副作用等原因，不為多數(shù)人接受。

胎盤(pán)是胎兒發(fā)育時(shí)期為胎兒的器官發(fā)育和成長(zhǎng)提供多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的場(chǎng)所，也是胎兒最初的造血器官。胎盤(pán)具有活躍的合成生物活性物質(zhì)的能力，支持胎兒的發(fā)育，包括多種激素(蛋白激素和甾體激素)和酶。近年研究顯示，胎盤(pán)組織含有多種干細(xì)胞；另外，臍帶的膠質(zhì)中也蘊(yùn)藏干細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種安全有效的消除妊娠紋的制劑及其制備方法。

本發(fā)明的制劑含有胎盤(pán)或臍帶干細(xì)胞分泌的物質(zhì)，稱(chēng)為干細(xì)胞提取物。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，該提取物本身，或與其它物質(zhì)形成的組合物，能夠顯著減輕或消除妊娠紋。本提取物為正常(人)細(xì)胞所產(chǎn)生，對(duì)皮膚無(wú)刺激性。

本發(fā)明提供一種制備干細(xì)胞提取物的方法。本發(fā)明所用制備干細(xì)胞提取物的干細(xì)胞，分離自正常人的胎盤(pán)或臍帶組織，經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)擴(kuò)增。該干細(xì)胞具有共同的特點(diǎn)：能夠貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞表面表達(dá)CD140a、CD105、CD73和CD29，不表達(dá)CD45。

本發(fā)明所用制備干細(xì)胞提取物的干細(xì)胞通過(guò)結(jié)合細(xì)胞貼壁特性和表面分子特征分離獲得；或直接根據(jù)細(xì)胞表面分子特征分選獲得。

結(jié)合細(xì)胞貼壁特性和表面分子特征的干細(xì)胞分離方法是，第一步根據(jù)細(xì)胞貼壁特性分離胎盤(pán)或臍帶細(xì)胞。胎盤(pán)細(xì)胞貼壁分離，方法是將胎盤(pán)組織切成小塊，用冷磷酸緩沖液(PBS)洗去游離的細(xì)胞，然后用0.25％胰蛋白酶/HBSS在37℃水浴中進(jìn)行順序消化兩次，每次10分鐘，收集兩次的消化液，并用等量含10％人血清的DMEM中和、洗滌并接種在細(xì)胞培養(yǎng)皿中，24小時(shí)后換液去除懸浮細(xì)胞。以后每3天換液一次，7-10天可見(jiàn)干細(xì)胞集落，繼續(xù)培養(yǎng)至培養(yǎng)皿中細(xì)胞70％飽和時(shí)胰蛋白酶消化收集細(xì)胞。

臍帶細(xì)胞貼壁法分離：將正常人臍帶用PBS反復(fù)沖洗，剝除血管和外膜，收集膠質(zhì)(Wharton's jelly)，剪切成約1mm小塊，種植在細(xì)胞培養(yǎng)皿上，用含10％人血清的DMEM在37℃和5％CO₂孵箱中培養(yǎng)，3-5天后小心換液，5-7天細(xì)胞從組織周邊長(zhǎng)出，用胰蛋白酶消化后收集細(xì)胞。

上述培養(yǎng)液中的DMEM可用IMDM或α-MEM替代。

第二步是根據(jù)細(xì)胞表面分子特征，分離胎盤(pán)和臍帶干細(xì)胞：從上述方法獲得的胎盤(pán)或臍帶細(xì)胞中，分離CD140a陽(yáng)性細(xì)胞。方法是先將培養(yǎng)的胎盤(pán)或臍帶細(xì)胞用胰蛋白酶消化，形成單細(xì)胞懸液，用攜帶抗CD140a抗體的免疫磁珠(Miltenyibiotec)或流式細(xì)胞儀分選CD140a陽(yáng)性細(xì)胞。