[發明專利]一種檢測載脂蛋白A5以診斷高甘油三酯血癥的試劑盒

在審

• 申請號: 201410362427.6
• 申請日: 2014-07-28
• 公開（公告）號: CN104165992A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 錢金宏;廖園園;廖偉
• 申請（專利權）人: 武漢璟泓萬方堂醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/92
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 唐正玉

技術領域

本發明涉及載脂蛋白A5(ApoA5)作為高甘油三酯血癥(HTG)診斷的生化指標，抗ApoA5抗體對的制備技術，酶標記顯色免疫反應技術和利用ApoA5的抗體來診斷高甘油三酯血癥(HTG)的技術領域，特別涉及一種定量檢測ApoA5以診斷高甘油三酯血癥(HTG)的試劑盒。

背景技術

臨床上檢測血脂的項目有很多，各醫院普遍檢查的基本項目有總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、載脂蛋白(Apo)B、Apo?AI、脂蛋白(a)[Lp(a)]等。調查資料研究表明，高甘油三酯、高膽固醇、低的高密度脂蛋白-C(HDL-C)和高的低密度脂蛋白-C(LDL-C)共同構成了冠心病的危險因素。載脂蛋白(Apo)異常與冠心病和中風密切相關。盡早進行正確診斷，有利于早期防治這些嚴重的疾病。載脂蛋白檢測試劑的開發，有助于冠心病和中風的有效防治。

血清ApoAI可以代表HDL水平，與HDL-C呈正相關，其臨床意義也大體相似。但是，HDL是一系列顆粒大小與組成不均一的脂蛋白，病理狀態下HDL亞類與組成往往會發生變化，故ApoAI的升降不一定與HDL-C變化完全成比例。ApoB100大約有有90％的比例分布在LDL中，所以血清ApoB主要代表LDL水平，它與血清LDL-C水平呈明顯正相關，ApoB水平高低的臨床意義也與LDL-C相似。但是，在少數情況下,可出現高ApoB100血癥而LDL-C濃度正常的情況，所以這兩種載脂蛋白可靠性和準確性都不十分令人滿意。

ApoA5屬于ApoAI/CIII/AIV基因群，在肝臟表達，與HDL/VLDL有關。ApoA5基因啟動子的單核苷酸變異(SNP)直接影響甘油三酯水平。實驗研究表明，在表達人類ApoA5轉基因的小鼠的血漿中甘油三酯的濃度下降為對照鼠的三分之一，而在缺少該基因的小鼠中卻增加了4倍。ApoA5作為高甘油三酯血癥的病因診斷指標具有很高的敏感性和特異性。

高水平甘油三酯可使小密低密度脂蛋白(sLDL)濃度升高，具有較強的致動脈粥樣硬化作用。甘油三酯水平越高，低密度脂蛋白中的膽固醇酯越多。人們已經證實，動脈粥樣硬化斑塊中的膽固醇主要來自于低密度脂蛋白，低密度脂蛋白既是血漿中含膽固醇最多的，也是致動脈粥樣硬化性最強的脂蛋白。另外，流行病學研究表明，高水平甘油三酯使高密度脂蛋白濃度下降，高密度脂蛋白濃度受甘油三酯水平的影響，兩者呈負相關。近來研究表明，血甘油三酯水平異常與體內凝血因子異常密切相關，血漿甘油三酯水平升高可以導致體內凝血因子水平升高，從而促進血凝，并可使組織型纖溶酶原激活物抑制劑(PAI)合成增加，抑制纖維蛋白溶解，形成高凝狀態，促進冠心病的發生。有實驗結果表明，甘油三酯濃度上升1mmol/L，心血管意外發生率男性上升32％，女性為76％。在校正高密度脂蛋白的影響后，危險率男性上升14％，女性為37％。這些結果表明血清甘油三酯濃度升高是心血管疾病的重要危險因素。

高甘油三酯血癥患者常同時有高血壓和胰島素抵抗。胰島素抵抗通常指患者有傾向于非胰島素依賴糖代謝異常，該類患者常較早地形成冠狀動脈疾病。通常將脂質三聯癥、高凝狀態、高血壓、胰島素抵抗稱為代謝綜合征。已證實高甘油三酯血癥患者常合并有代謝綜合征中的其它異常。高甘油三酯血癥的臨床意義在于此。而作為直接影響甘油三酯水平的指標ApoA5顯得尤為重要，ApoA5的單核苷酸多態性有望作為風險指示標和降低血脂濃度的治療靶點。

本發明就是將ApoA5通過ELISA實驗應用于臨床實踐以達到高甘油三酯血癥的病因診斷，以及冠心病和中風等心血管疾病有效防治的目的。

ApoA5的酶聯免疫定量測定，絕大部分運用了二株抗體，如專利200610018747.5，一株單克隆抗體為捕獲抗體，另一株單克隆抗體(或多克隆抗體)為標記抗體，形成酶聯夾心法測定ApoA5。但這一方法測定ApoA5的線性范圍窄，因此其測定靈敏度和準確度都受到限制。

發明內容