[發明專利]檢測男性不育癥Kif18a基因1個致病突變位點的試劑盒及其PCR擴增方法

在審

• 申請號: 201410361960.0
• 申請日: 2014-07-28
• 公開（公告）號: CN105316396A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發明（設計）人: 朱威;賀雄雷;郭蕾;雷楗勇;潘武廣
• 申請（專利權）人: 廣州君赫生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測人類男性不育癥致病基因突變的PCR試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括檢測男性不育癥Kif18a基因中1個致病突變位點T183C的一組特異性引物中及PCR反應mix。

2.根據權利要求1，以男性不育癥Kif18a基因致病位點T183C所在的Kif18a基因的第1外顯子DNA序列為模板設計引物，其特征在于：針對致病位點T183C所設計的引物對中，正常模板配對引物中上游引物的3’端含有序列CAAATC，突變模板配對引物中上游引物的3’端含有序列CAAACC，其中3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或將-2位堿基經鎖核酸化（LNA）修飾。

3.根據權利要求2，優選的一組特異性引物的序列分別如下所示：

正常模板配對引物T183CNF：5’-AGAAAACTACAAATC-3’；突變模板配對引物T183CMF：5’-AGAAAACTACAAACC-3’；共同的下游引物T183CR：5’-TCTTAAGAATTTTTA-3’，其中，所述正常模板配對引物T183CNF和突變模板配對引物T183CMF的3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或將-2位堿基經鎖核酸化（LNA）修飾。

4.根據權利要求3，所述正常模板配對引物及突變模板配對引物的3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或將-2位堿基經鎖核酸化（LNA）修飾。

5.一種采用權利要求1和2檢測人類男性不育癥Kif18a基因中1個致病突變位點T183C的PCR擴增方法，其特征在于：PCR擴增由預變性和30-40次擴增溫度循環組成，循環條件為95℃預變性10min，94℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30sec，循環30-40次，循環結束后72℃補齊延伸10min后反應結束。