[發明專利]基于軟骨內成骨體系的組織工程骨及其構建方法

有效

• 申請號: 201410360325.0
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN104096266A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 董世武;康菲;竇策;楊小超;李建美;曹震
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/56
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.基于軟骨內成骨體系的組織工程骨的構建方法，其特征在于，將間充質干細胞種植于多孔骨支架材料上構建組織工程復合體，再在體外對其進行成軟骨分化誘導培養2周，繼而進行成肥大化軟骨分化誘導培養2周，即得基于軟骨內成骨體系的組織工程骨。

2.如權利要求1所述的基于軟骨內成骨體系的組織工程骨的構建方法，其特征在于，所述間充質干細胞為骨髓間充質干細胞、外周血間充質干細胞、臍血間充質干細胞、脂肪間充質干細胞或臍帶間充質干細胞。

3.如權利要求2所述的基于軟骨內成骨體系的組織工程骨的構建方法，其特征在于，所述間充質干細胞為骨髓間充質干細胞。

4.如權利要求1所述的基于軟骨內成骨體系的組織工程骨的構建方法，其特征在于，所述多孔骨支架材料為脫細胞骨基質或脫鈣骨基質。

5.如權利要求4所述的基于軟骨內成骨體系的組織工程骨的構建方法，其特征在于，所述多孔骨支架材料為脫鈣骨基質。

6.如權利要求1所述的基于軟骨內成骨體系的組織工程骨的構建方法，其特征在于，所述成軟骨分化誘導培養采用完全軟骨誘導培養基，所述完全軟骨誘導培養基為DMEM低糖培養基中添加10ng/mL?TGF-β3，1wt％ITS+premix，100mg/mL鏈霉素、100U/mL青霉素、50μg/mL維生素C、40μg/mL脯氨酸和100nM地塞米松；所述成肥大化軟骨分化誘導培養采用肥大化軟骨誘導完全培養基，所述肥大化軟骨誘導完全培養基為DMEM低糖培養基中添加1wt％ITS+premix、100mg/mL鏈霉素、100U/mL青霉素、50μg/mL維生素C、40μg/mL脯氨酸、1nM地塞米松和20-100ng/mL的三碘甲狀腺原氨酸。

7.如權利要求1至6任一項所述的基于軟骨內成骨體系的組織工程骨的構建方法，其特征在于，取脫鈣骨基質支架材料，用DMEM培養基浸泡48小時，調節pH值為7.2；取第二代處于指數增長期的骨髓間充質干細胞，用PBS洗滌后，用0.1wt％I型膠原酶溶液孵育1小時，再加入含0.25wt％胰酶與0.02wt％EDTA的溶液消化3～5分鐘，用含10wt％胎牛血清的DMEM培養基洗滌并重懸后，接種至前述處理后的脫鈣骨基質支架材料上，使細胞懸液剛好浸潤支架材料且不溢出支架材料之外；3小時后在無菌操作條件下將脫鈣骨基質支架材料的底面翻轉變成頂面，同前述方法接種細胞懸液；3小時后加入含10wt％胎牛血清的DMEM培養基至剛好沒過脫鈣骨基質支架材料的頂面，再在37℃、5％CO₂條件下培養；24小時后，在體外對其進行成軟骨分化誘導培養2周，繼而進行成肥大化軟骨分化誘導培養2周，即得基于軟骨內成骨體系的組織工程骨。

8.采用權利要求1至7任一項所述方法構建的基于軟骨內成骨體系的組織工程骨。