[發(fā)明專利]一種檢測(cè)男性不育癥Fkbp6基因突變位點(diǎn)的試劑盒及其PCR擴(kuò)增方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410360133.X
• 申請(qǐng)日: 2014-07-28
• 公開（公告）號(hào): CN105316395A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱威;賀雄雷;郭蕾;潘武廣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州君赫生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測(cè)人類男性不育癥致病基因突變的PCR試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括檢測(cè)男性不育癥Fkbp6基因中1個(gè)致病突變位點(diǎn)T141G的一組特異性引物中及PCR反應(yīng)mix。

2.根據(jù)權(quán)利要求1，以男性不育癥Fkbp6基因致病位點(diǎn)T141G所在的Fkbp6基因的第2外顯子DNA序列為模板設(shè)計(jì)引物；其特征在于：針對(duì)致病位點(diǎn)T141G所設(shè)計(jì)的引物對(duì)中，正常模板配對(duì)引物中上游引物的3’端含有序列GAGCTG，突變模板配對(duì)引物中上游引物的3’端含有序列GAGCGG；其中3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或?qū)?2位堿基經(jīng)鎖核酸化（LNA）修飾。

3.根據(jù)權(quán)利要求2，優(yōu)選的一組特異性引物的序列分別如下所示：

正常模板配對(duì)引物T141GNF：5’-TCCGAGAAGGAGCTG-3’；突變模板配對(duì)引物T141GMF：5’-TCCGAGAAGGAGCGG-3’；共同的下游引物T141GR：5’-AGGCTGAGGCAGGAG-3’；其中，所述正常模板配對(duì)引物T141GNF和突變模板配對(duì)引物T141GMF的3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或?qū)?2位堿基經(jīng)鎖核酸化（LNA）修飾。

4.根據(jù)權(quán)利要求3，所述正常模板配對(duì)引物及突變模板配對(duì)引物的3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或?qū)?2位堿基經(jīng)鎖核酸化（LNA）修飾。

5.一種采用權(quán)利要求1和2檢測(cè)人類男性不育癥Fkbp6基因中1個(gè)致病突變位點(diǎn)T141G的PCR擴(kuò)增方法，其特征在于：PCR擴(kuò)增由預(yù)變性和30-40次擴(kuò)增溫度循環(huán)組成，循環(huán)條件為95℃預(yù)變性10min，94℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30sec，循環(huán)30-40次；循環(huán)結(jié)束后72℃補(bǔ)齊延伸10min后反應(yīng)結(jié)束。