[發(fā)明專利]一種檢測男性不育癥Katnal1基因突變位點(diǎn)的試劑盒及其PCR擴(kuò)增方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410360091.X
• 申請(qǐng)日: 2014-07-28
• 公開（公告）號(hào): CN105296603A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱威;賀雄雷;郭蕾;雷楗勇;潘武廣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州君赫生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的臨床檢測技術(shù)，涉及對(duì)人類男性不育癥基因致病突變位點(diǎn)的檢測方法。

本發(fā)明提供一種檢測人類男性不育癥致病基因突變的PCR試劑盒。本發(fā)明的內(nèi)容涉及一種檢測男性不育癥Katnal1基因中1個(gè)致病突變位點(diǎn)的試劑盒及其PCR擴(kuò)增方法，該檢測結(jié)果可用來臨床輔助檢測男性不育癥。

背景技術(shù)

男性不育癥，是指男子在規(guī)律性生活且未避孕的情況下，一年內(nèi)未使健康配偶妊娠。男性不育癥（MaleInfertility）嚴(yán)重影響現(xiàn)代男性健康和家庭幸福，據(jù)WTO統(tǒng)計(jì)表明：育齡夫婦約15%不能生育，其中男性因素占50%。導(dǎo)致男性不育的原因復(fù)雜廣泛，涉及生殖系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)和功能、激素調(diào)節(jié)、遺傳物質(zhì)、感染免疫等諸多方面的異常和障礙。其中相當(dāng)一部分屬于原因不明的特發(fā)性不育，包括特發(fā)性無精子、弱精子、少精子、畸形精子癥。

目前，分子生物學(xué)方法已經(jīng)深入到男性不育癥研究當(dāng)中。導(dǎo)致男性不育的遺傳損害是多種多樣的，除了染色體非整倍體畸形和基因重排，還包括微缺失和單個(gè)基因缺陷。小鼠和果蠅基因敲除實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)超過3000個(gè)基因涉及雄性生育能力的遺傳調(diào)控，相關(guān)基因不僅涉及生精細(xì)胞系，還包括與性腺及軀體發(fā)育相關(guān)的功能基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。目前發(fā)現(xiàn)了一大批涉及男性不育的染色體畸形和多效性單基因遺傳病。

1．AZF基因

1976年,Tiepolo和Zuffardi通過核型分析發(fā)現(xiàn)了6例無精子癥患者Y染色體長臂的微缺失并提出了無精子因子（AZF）概念，隨后的研究將其定位于Yq11.23，AZFa缺失表現(xiàn)為唯支持細(xì)胞綜合征，AZFb缺失表現(xiàn)為生精阻滯，AZFc缺失的病理表現(xiàn)為從正常到無精子。AZF并不是單一的基因，而是在功能上相互關(guān)聯(lián)的基因家族，在精子發(fā)生、發(fā)育和成熟中發(fā)揮重要作用，各種研究表明嚴(yán)重精子發(fā)生障礙包括無精子癥患者中約有3%-15%具有Y染色體微缺失。

2．X來源睪丸特異性逆基因

在精子發(fā)生的減數(shù)分裂期，性染色體隔離為XY小體，處于轉(zhuǎn)錄失活狀態(tài)，X染色體上活躍表達(dá)的管家基因也停止轉(zhuǎn)錄，而在此時(shí)，常染色體上一些X染色體來源睪丸特異性逆基因開始轉(zhuǎn)錄表達(dá)，對(duì)其前輩基因的缺失表達(dá)起到補(bǔ)償作用，這稱為補(bǔ)償假說，該假說認(rèn)為逆基因在精子發(fā)生中發(fā)揮重要作用，它們的突變可能導(dǎo)致男性不育癥的發(fā)生。一名少精子癥男子發(fā)生在10q22的交互易位，CSTE2T基因就位于10q22~q23,研究推斷少精子癥的發(fā)生與其有關(guān)。

3.性激素相關(guān)基因

比較常見的有雄激素受體基因（AR），卵泡刺激素受體基因（FSHR），黃體生成素受體基因（LHR），促性腺激素基因,促性腺激素釋放激素受體基因（GnRHR）。其中，人FSH受體基因第7個(gè)外顯子的純合子點(diǎn)突變表現(xiàn)為不同程度的生精損害。LHR基因突變導(dǎo)致的功能喪失會(huì)引起睪丸間質(zhì)細(xì)胞發(fā)育不良，輕者表現(xiàn)為性腺功能減退，重者表現(xiàn)為男性假兩性畸形。FSH-b突變的男性呈現(xiàn)無精子癥的表現(xiàn)。

4.線粒體相關(guān)基因

線粒體DNA的完整性和精子活動(dòng)及精液質(zhì)量普遍相關(guān)。KaoS在1995年發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)力最低的精子細(xì)胞擁有最高的4977bpmtDNA缺失率，認(rèn)為mtDNA突變?cè)诰硬∽冎邪l(fā)揮重要作用。

5.人類生精階段標(biāo)志基因

精子的生成需要經(jīng)歷有絲分裂、減數(shù)分裂和精子形成等幾個(gè)階段，不育癥患者可出現(xiàn)不同階段的生精阻滯。研究發(fā)現(xiàn)，在某一個(gè)階段特異性的表達(dá)某些調(diào)控生精的關(guān)鍵基因，利用睪丸活檢組織進(jìn)行特定基因表達(dá)譜檢測，就可了解精子發(fā)生阻滯的階段。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和男性不育癥致病基因定位的日漸明確，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和基因測序等技術(shù)進(jìn)行分子檢測逐漸大行其道，其中，“分子開關(guān)”檢測突變由于其操作簡單、不用測序、成本低廉等優(yōu)勢(shì)，成為廣泛應(yīng)用的一項(xiàng)技術(shù)。