[發明專利]仲丁胺膠體金試紙條的制備及使用方法

在審

• 申請號: 201410359093.7
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN105301236A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 杜道林;江振飛;洪霞
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于食品安全檢測領域，具體涉及食品中仲丁胺藥物殘留的一種快速膠體金試紙條的制備及使用方法。

背景技術

仲丁胺(2-aminobutane，簡稱2-AB)又名2-氨基丁烷，是一種保護性殺菌劑，對多種真菌有抗菌活性可用作蒜薹、青椒、柑橘、葡萄的貯藏期防腐保鮮劑。2-AB首先在歐洲得到廣泛應用，我國自1976年開始應用。國內外尚未見2-AB致癌和誘變作用的報道，但是。美國已將其對人體健康的危害等級定為三級。并對其應用范圍和最大允許殘留量作了規定，荔枝、柑橘、蘋果(果肉)的殘留量分別為≤0.009g/kg、0.005g/kg、0.001g/kg。

仲丁胺食入過多可導致對身體有害。對眼睛、皮膚、粘膜及呼吸道有強烈刺激性。吸入后可因喉、支氣管的痙攣、水腫，化學性肺炎、肺水腫而致死。長時間接觸可引起局部嚴重刺激或灼傷。

目前對仲丁胺的檢測主要使用氣相和液相色譜分析，這些方法不僅需要昂貴的儀器設備，對檢材的要求也比較高，需要進一步的提純處理才能進行，不利于推廣應用。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的不足，提供一種特異性強，靈敏度高，且操作簡單方便，對樣品經過簡單處理即可檢測的仲丁胺快速試紙半定量檢測方法。

本發明的目的可通過以下技術方案來實現：

仲丁胺膠體金試紙條檢測方法其技術要點是：試紙的背襯上依次貼有樣品墊和金標墊和硝酸纖維素膜和吸水吸水紙，金標墊上被標記的物質為第二種屬動物蛋白與仲丁胺抗體的混合物；硝酸纖維素膜上包被有仲丁胺檢測用抗原1條作為檢測線，同時還包被有抗第二種屬動物蛋白的IgG1條作為參考線。在試紙制備時通過調節檢測線和參考線包被物的濃度，控制檢測時檢測線和參考線的顯色深淺，并將其顯色深淺與標準物質濃度對應起來，達到半定量檢測。

所述的檢測用抗原是指仲丁胺與載體物質明膠形成的偶合物，免疫用抗原是指仲丁胺與載體物質是孔血藍蛋白（KLH）形成的偶合物。

所述的載體物質也可以選用其他大分子物質，如：脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵清白蛋

白等，但要求檢測用抗原與免疫用抗原的載體無交叉免疫反應。

所述的第二種屬動物蛋白指非抗體來源屬動物的蛋白，例如，抗體為兔源性，則第二種屬動物蛋白可以是卵清白蛋白、豬血清白蛋白等雞、鴨或其他非兔源性動物蛋白。

本發明所描述的試紙的各部分處理與功能如下：

背襯：為一面涂有不干膠的不吸水的韌性材料，如PVC板，起固定支持試紙其他組成部分的作用。

樣品墊制備：將濾紙或玻璃纖維紙浸入pH7.0-8.4的PBS中約2min，取出，40℃烘干或其他方式干燥，即作為樣品墊，檢測時起吸收樣品溶液的作用，便于樣品溶液向上移動。

金標墊的制備：該部分起固定膠體金標記的抗原或抗體的作用。

制備步驟包括膠體金溶液的制備、膠體金標記仲丁胺抗體。

（1）膠體金溶液的制備：將氯金酸（HAuCl₄）用超純水配制成1%的溶液。取超純水1000mL，加熱至沸騰，加入10mL1%氯金酸溶液，再次加熱至沸騰。然后加入10mL2%的檸檬酸三鈉水溶液，繼續加熱至出現透明的橙紅色為止，即為膠體金溶液。

（2）膠體金標記仲丁胺抗體：將仲丁胺單克隆抗體或多克隆抗體和第二種屬蛋白分別用PBS（0.01mo1/L，pH7.0-7.5）溶解稀釋至2-4mg/mL，每100mL膠體金溶液加入1-3mL2-4mg/mL的仲丁胺抗體和1-1.5mL2-4mg/mL第二種屬動物蛋白，震蕩2min，用0.1mol/L的K₂CO₃，調節pH至8.4，震蕩5min，加入11%PEG-100002mL，震蕩5min，6000-13000r/min離心15min，除去上清，將沉淀用PBS（0.01mo1/L，pH7.0-7.5）復溶，以8000-15000r/min離心15min，除去上清，將沉淀用PBS（0.0lmol/L，pH7.0-7.5）稀釋500-2000倍，產物作為金標仲丁胺抗體。

（3）金標墊處理：將仲丁胺抗原或仲丁胺抗體倒入一槽中，將玻璃纖維或濾紙浸入1min，取出，室溫干燥后，即作金標墊。