[發(fā)明專利]一種通過添加金屬離子提高龍須菜寡糖產(chǎn)量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410359052.8
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN104164461A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 產(chǎn)竹華;劉勝龍;陳興麟;曾潤穎;王潤萍
• 申請（專利權(quán)）人: 國家海洋局第三海洋研究所
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12R1/01
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及龍須菜寡糖，尤其是涉及一種通過添加金屬離子提高龍須菜寡糖產(chǎn)量的方法。

背景技術(shù)

本申請人在中國專利CN102827899A中提供了一種龍須菜瓊膠寡糖及其制備方法與應(yīng)用，制備方法：1)將菌株太平洋火色桿菌(Flammeovirga?Pacifica)H2用活化培養(yǎng)基平板進(jìn)行活化后，接種于種子培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)得發(fā)酵液；所述活化培養(yǎng)基平板為：含經(jīng)60～80目過篩后的龍須菜粉末1％，酵母膏0.2％，NaCl3％，瓊膠粉1.5％，蒸餾水配制，經(jīng)121℃，20min滅菌后使用；所述種子培養(yǎng)基為：含CMC-Na₂0.5％～1.5％，酵母膏0.2％，NaCl3％，蒸餾水配制，經(jīng)121℃，20min滅菌后使用；所述太平洋火色桿菌(Flammeovirga?Pacifica)H2已于2012年6月13日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:M2012229。

龍須菜寡糖以太平洋火色桿菌(Flammeovirga?Pacifica)H2為出發(fā)菌株，以龍須菜為底物發(fā)酵產(chǎn)生的一種具有自主知識產(chǎn)權(quán)的寡糖。前期對所制備的龍須菜寡糖的活性進(jìn)行了初步的研究，結(jié)果表明，該龍須菜寡糖對荔枝、龍眼、圣女果、楊梅以及草莓等具有較好的保鮮作用，延長了貯藏期和貨架壽命；可以有效抑制核盤菌的生長，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的應(yīng)用提供了依據(jù)；具有抗氧化的生物活性，在保健品方面具有良好的應(yīng)用價值。

上述制備方法將菌株與龍須菜共培養(yǎng)，利用菌株所產(chǎn)的酶系直接降解龍須菜獲得寡糖，步驟簡單，環(huán)境污染小，成本低。然而，在Flammeovirga?PacificaH2進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)時，龍須菜寡糖的產(chǎn)量較低，制約了其作為功能性生物制品的開發(fā)研究，因此提高其龍須菜寡糖量是必須加以解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有的龍須菜寡糖產(chǎn)量低的缺陷，提供一種通過添加金屬離子提高龍須菜寡糖產(chǎn)量的方法。

本發(fā)明以太平洋火色桿菌(Flammeovirga?Pacifica)H2為生產(chǎn)菌株，在基本培養(yǎng)基中添加鈉、鉀、銅、亞鐵、鎂、鋅等離子化合物中的一種；所述基本培養(yǎng)基的組成為20～50g龍須菜干粉，加入自來水1000mL。

所述鈉、鉀、銅、亞鐵、鎂、鋅等離子化合物可采用鈉、鉀、銅、亞鐵、鎂、鋅等離子氯化物等。

鈉離子化合物可采用氯化鈉等，鉀離子化合物可采用氯化鉀等，銅離子化合物可采用氯化銅等，亞鐵離子化合物可采用氯化亞鐵等，鎂離子化合物可采用氯化鎂等，鋅離子化合物可采用氯化鋅等。

所述鈉、鉀、銅、亞鐵、鎂、鋅等離子化合物的初始添加時間可為0～24h，最好均為0h。

所述鈉、鉀、銅、亞鐵、鎂、鋅等離子化合物的添加方式可為每次添加25～50mg/L，連續(xù)添加2～4次，使離子最終濃度達(dá)到50～200mg/L；鈉、鉀、銅、亞鐵、鎂、鋅等離子化合物的添加方式最好均為每隔6～12h添加一次，每次添加25～50mg/L，連續(xù)添加2～4次，使離子最終濃度達(dá)到50～200mg/L。

太平洋火色桿菌(Flammeovirga?Pacifica)H2的保存條件為-80℃超低溫冰箱。采用的種子培養(yǎng)基為：羧甲基纖維素鈉10g/L，酵母粉2g/L，瓊脂粉0.5g/L，沙濾海水1L，經(jīng)121℃，20min高溫滅菌冷卻后使用。培養(yǎng)方法如下：

將低溫冷凍保藏的菌株H2接種到裝有50mL滅菌過的種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，30℃、180r/min培養(yǎng)20～24h，按體積比5％接入到基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)40～48h，離心取上清檢測龍須菜寡糖的含量。

本發(fā)明所述龍須菜寡糖的分析方法如下：

由于龍須菜寡糖為還原性糖，因此可采用DNS法測還原糖含量來測定龍須菜寡糖的含量。還原糖能與DNS溶液發(fā)生顯色反應(yīng)，通過比色法作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可測出還原糖含量。所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法如下：

稱取在105～110℃干燥后的葡萄糖50mg，用蒸餾水溶解定容到50mL，即得1mg/mL葡萄糖液，再稀釋成不同濃度的葡萄糖液，再與水按體積比1∶3的比例混合，煮沸15min；冷卻離心后，用721分光光度計測定550nm波長處的吸光度值，以葡糖濃度為橫坐標(biāo)，OD₅₅₀為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以此做標(biāo)準(zhǔn)可得到樣品液中還原糖的含量。

本發(fā)明旨在通過金屬離子對龍須菜寡糖的代謝進(jìn)行調(diào)控以實現(xiàn)龍須菜寡糖產(chǎn)量的提高，從而為大規(guī)模制備龍須菜寡糖提供技術(shù)支持，為開發(fā)龍須菜寡糖功能生物制品奠定基礎(chǔ)。