[發明專利]一種從發酵液中提取尼莫克汀的方法

在審

• 申請號: 201410358600.5
• 申請日: 2014-07-26
• 公開（公告）號: CN105272992A
• 公開（公告）日: 2016-01-27
• 發明（設計）人: 潘劍;陶云國;梁昌海;周華強
• 申請（專利權）人: 海正藥業（杭州）有限公司
• 主分類號: C07D493/22
• 分類號: C07D493/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及藥物化學領域。具體而言，本發明涉及一種從發酵液中提取尼莫克汀的方法，更尤其，本發明涉及一種結合使用陶瓷膜、樹脂柱并結合使用有機溶劑將發酵液中的尼莫克汀以異常高的收率提取出來的方法。

背景技術

尼莫克汀(Nemadectin)是一種十六元大環內酯類抗生素，由藍灰鏈霉菌(Streptomycescyaneogriseussp.Noncyanogenus)經發酵過程生產。作為米爾貝霉素族的一員，尼莫克汀主要用于合成莫西克汀(Moxidectin)，后者是一種大環內酯類的農用抗生素，主要用于治療牛羊等動物體內的寄生蟲病。

歐洲專利EP0170006A2公開了一種尼莫克汀的生產培養基與發酵工藝,首先將藍灰鏈霉菌接種于含葡萄糖1.0％、糊精2.0％、酵母浸出物0.5％、NZ胺(酪蛋白的酶促水解物)0.5％和碳酸鈣0.1％的培養基中(各物質的百分含量單位是g/mL，例如0.1％即0.001g/mL，指100mL溶液中含有0.1g溶質，這是生化領域中將固體物質配制成溶液試劑時通用的濃度表示方法)，28℃培養48-72h，作為一級種子；將一級種子接入同樣的培養基，28℃培養48h，作為二級種子；然后將1L二級種子液接入含糊精1.0％、大豆蛋白胨1.0％、糖蜜1.0％、碳酸鈣0.1％的培養基30L中，于30℃發酵培養，發酵罐的空氣流量30L/min，罐壓8磅，攪拌500rpm，培養91h后放罐。該發明同時公開了發酵液中包括尼莫克汀及其結構類似物在內的發酵產物的分離純化方法：對發酵液加硅藻土為助濾劑過濾得到濕菌絲渣；用甲醇萃取濕菌絲渣；萃取液經濃縮后再用二氯甲烷萃取；收集二氯甲烷相經無水硫酸鈉干燥、濃縮，再經硅膠柱層析得到尼莫克汀。該方法的缺陷在于，由于過濾發酵液困難而使用了大量助濾劑，產生大量過濾廢水，導致環境污染；使用甲醇萃取濕菌絲渣，甲醇的用量過大；而且使用一次性硅膠分離尼莫克汀，提取成本較高。

目前從發酵液中提取尼莫克汀的方法基本是（1）用板框壓濾機或離心機實現菌絲體和水相的分離，用有機溶劑浸泡菌絲體提取脂溶性目標組分。上述方法的缺點是板框的裝拆、物料的卸出和濾布的清洗都為手工操作，并且輔助時間長，勞動強度大，生產效率低，從而影響整個生產的進度；部分游離在水相中的脂溶性目標組分在菌絲體和水相分離時隨水相進入廢水中；操作對環境不友好，有機溶劑耗用量大；因菌絲體中成分復雜，在有機溶劑提取過程中易造成大量乳化，進而影響收率和質量。（2）用有機溶劑直接在發酵液中浸提尼莫克汀。上述方法的缺點是溶劑耗用量大（例如乙醇、甲醇等），易乳化；同時需要使用到大量的助濾劑，既增加成本也增加人工勞動強度，同時還會造成環境污染。上述方法處理后往往產品濾液的質量不高，增加后面的工藝負荷，如增加樹脂柱的處理時間，增加柱子的再生頻率，降低其使用壽命等。

現代膜分離技術起源于20世紀60年代，是一種新型的流體分離單元操作技術。它以高分子分離膜為分離介質，以壓力差、濃度差、電位差等為傳質驅動力，將待分離流體中的不同物質按照分子量、顆粒或電荷的不同進行分離。由于膜分離技術具有高效節能等特點，自第一套工業化設備推向市場以來，得到了迅猛發展，目前已遍及幾乎所有工業領域。按照膜分離的不同原理，可以把膜分成過微濾膜、超濾膜、納濾膜、反滲透膜、透析膜、電滲析膜、滲透汽化膜以及氣體分離膜等不同種類。

目前尚未發現有采用膜分離技術，特別是陶瓷膜來濃縮發酵液，進而提取尼莫克汀的報道。

應用大孔吸附樹脂進行分離的技術是20世紀60年代末發展起來的繼離子交換樹脂后的分離新技術之一。大孔吸附樹脂是一種不含離子基團的網狀結構的高分子聚合物吸附劑，具有吸附性強、解吸附容易、機械強度好、可反復使用、流體阻力小等優點，其分離性能與樹脂本身性質、溶劑因素和被分離的化合物性質等有關。隨著在藥物化學成分提取、分離、富集中的進一步應用，大孔吸附樹脂必將有利于藥物制劑工藝的改進，有利于促進藥物現代化研究的進程。

目前也未發現大孔吸附樹脂與膜分離技術結合來從發酵液中提取尼莫克汀的報道。

發明內容

本發明致力于提供一種更簡單有效、環保、成本低的用于從發酵液中以高收率提取尼莫克汀的方法，即使發酵液的質量很差。

用于從發酵液中提取尼莫克汀的本發明的方法包括：

a）用陶瓷膜濃縮發酵液，任選，接著

b）向發酵液濃縮液中持續加入或間歇加入一種或數種選自醇、二醇、酮、酯類、羧酸類有機溶劑或上述溶劑與水的混合物，并使用陶瓷膜浸提，獲得尼莫克汀浸提液。