[發明專利]一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201410358141.0
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN104480097A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 單俊偉;翟熙倫;王鵬;王海華;王真真;喬來艷
• 申請（專利權）人: 青島海大生物集團有限公司
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C05F17/00;C05G3/00;C09K17/00;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 楊秉利

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，尤其涉及一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑及其制備方法和應用。

背景技術

我國是一個農業大國，農作物的產量及質量關系著國計民生。目前，促進和保護作物生長主要靠使用農藥、化肥，但農藥、化肥的過量濫用，造成土壤板結、土壤鹽漬化和重金屬污染，嚴重污染農業生態環境，危害人類的健康。

近年來，在國家政策允許下，一部分農藥、化肥逐步被微生態合劑代替，微生態制劑既有肥料的效果，又有農藥的功效，把植物保護與植物營養合二為一，同時，微生物肥料也存在著多種菌株共生性較差、無法適應脅迫環境、與無機肥料復配存活率較低等弊端。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：針對我國化學肥料過量濫用、生物肥料使用的多種弊端，本發明提供了一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑及其制備方法和應用。本發明所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑無污染，能夠達到肥料和農藥的配合使用功效，工藝簡單、成本低，具有有利于保護環境、抗病性和抗逆性強、提高存活率、易于產業化生產等優點。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑，它包括囊內物質和囊壁物質：所述囊內物質包括嗜熱脂肪地芽孢桿菌、花域芽孢桿菌、甲基營養型芽孢桿菌和西姆芽孢桿菌，所述四株菌均保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為：嗜熱脂肪地芽孢桿菌為CGMCC?No.7572、花域芽孢桿菌為CGMCC?No.7571、甲基營養型芽孢桿菌菌株為CGMCC?NO.7570、西姆芽孢桿菌為CGMCC?No.7285；所述囊壁物質主要組分是滸苔多糖。

進一步的，所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑中，四株菌的菌含量為：嗜熱脂肪地芽孢桿菌20%、花域芽孢桿菌10%、甲基營養型芽孢桿菌10%、西姆芽孢桿菌60%，按活菌數百分比計算。

本發明還提供了所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法，它包括以下步驟：

(1)?制備一級種子液：將所述四菌株在溫度為35℃下恒溫搖床培養得到一級種子液；

(2)?制備二級種子液：將所述一級種子液按5%的接種量接種到二級發酵罐中培養得到二級種子液，培養溫度與步驟(1)?相同；

(3)?發酵生產：將所述二級種子液分別轉接入生產發酵罐中，通氣量為100-150?升/?分鐘；以發酵液中芽孢含量超過80%?為指標，終止發酵；

(4)?菌液復配：將四菌株的發酵液混合復配得到混合菌液；

(5)?制備菌劑產品：將所述混合菌液過篩，加入滸苔多糖，復配得到綠藻糖基微膠囊生物菌劑。

進一步的，所述滸苔多糖的制備方法包括以下步驟：

a.預處理：將滸苔粉經過熱水浸提得到可溶組分，將所述可溶組分進行過氧化氫預處理；

b.提取：利用生物酶法對所述步驟(a)所得產物進行提取；

c.分級洗脫：將所述步驟(b)所得產物和不同濃度NaCl經DEAE?Sepharose?Fast?Flow分級洗脫，得到所述滸苔多糖。

進一步的，上述綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法中，所述步驟(1)?搖床轉速150-220?轉/?分鐘，步驟(2)?二級發酵罐轉速為100-150?轉/?分鐘，步驟(3)?生產發酵罐轉速為100-150?轉/?分鐘。

所述步驟(2)?中二級種子的發酵培養基分別為：

西姆芽孢桿菌：玉米粉?2.0?g/L，葡萄糖?10.0?g/L，豆餅粉?10.0?g/L，蛋白胨4.0?g/L，碳酸鈣?5.0?g/L，磷酸氫二鉀?0.3?g/L，硫酸鎂?0.4?g/L，硫酸錳0.1?g/L，pH?值7.5-8.0；

嗜熱脂肪地芽孢桿菌：淀粉3.0?g/L，葡萄糖5.0?g/L，豆粕25.0?g/L，蛋白胨2.0g/L，碳酸鈣5.0?g/L，磷酸氫二鉀0.3?g/L，硫酸鎂0.4?g/L，硫酸錳0.1?g/L，pH?值7.5-8.0；

甲基營養型芽孢桿菌：淀粉3.0?g/L，蔗糖5.0?g/L，豆粕10.0?g/L，蛋白胨2.0?g/L，碳酸鈣5.0?g/L，磷酸氫二鉀0.3?g/L，硫酸鎂0.4?g/L，硫酸錳0.1?g/L，pH?值7.0-7.5；