[發明專利]一種制備利那洛肽的方法

有效

• 申請號: 201410357720.3
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN104163853B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發明（設計）人: 朱明月;周亮;路楊;楊東暉
• 申請（專利權）人: 杭州阿諾生物醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備利那洛肽的方法，所述方法步驟如下：

步驟1，結合固液相方法合成五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl；

步驟2，通過固相方法合成九肽片段樹脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王樹脂；

步驟3，將五肽片段Ⅰ加入九肽片段樹脂Ⅱ中，通過硫酯交換和S→N?酰基轉移得到新的長肽片段樹脂，脫Fmoc保護基，裂解后得到利那洛肽線性肽；

步驟4，最后采用GSH/GSSH氧化體系氧化得到利那洛肽。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征是：

其中，步驟1所述的五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl的合成方法包括如下步驟：1）采用2-CTC樹脂為起始樹脂，在活化劑系統的存在下，?Fmoc-Cys(Trt)-OH和2-CTC樹脂偶聯得到取代度為0.10~0.90?mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-CTC樹脂；2）采用由體積比為1:4的哌啶和DMF組成的去保護液脫除上Fmoc-Cys(Trt)-CTC樹脂的Fmoc保護基，得到H-Cys(Trt)-CTC樹脂；3）在偶聯劑系統的存在下，H-Cys(Trt)-CTC樹脂和Fmoc保護且側鏈保護的酪氨酸偶聯得到Fmoc-Tyr(tBu)-Cys(Trt)-CTC樹脂；4）重復步驟2）、3），依次進行氨基酸（Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH）偶聯得到Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-?CTC樹脂；5）采用由體積比為1:4?的TFE和DCM組成的裂解液裂解樹脂后得到Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH；6）采用液相方法，Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-OH、HSBzl和DIC偶聯得到合成Fmoc-Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)-SBzl；7）采用由體積比為2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H₂O和TFA的裂解液去五肽側鏈保護基得到五肽片段Ⅰ：Fmoc-CysCysGluTyrCys-SBzl。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征是：

其中，步驟2所述九肽片段樹脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王樹脂的合成方法包括如下步驟：1）采用王樹脂為起始樹脂，在活化劑系統的存在下，?Fmoc-Tyr(tBu)-OH和王樹脂偶聯得到取代度為0.10~0.90?mmol/g取代度的Fmoc-Tyr(tBu)-王樹脂；2）采用由體積比為1:4的哌啶和DMF組成的去保護液脫除上Fmoc-Tyr(tBu)-王樹脂的Fmoc保護基，得到H-Tyr(tBu)-王樹脂；3）在偶聯劑系統的存在下，H-Tyr(tBu)-王樹脂和Fmoc保護且側鏈保護的半胱氨酸偶聯得到Fmoc-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-王樹脂；4）重復步驟2）、3），依次進行氨基酸(Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH)偶聯得到Fmoc?-Cys(Mmt)Asn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王樹脂；5）采用由體積比為1:2:7的TFE、AcOH和DCM的裂解液去Mmt保護基得到Fmoc?-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王樹脂；6）采用由體積比為1:4的哌啶和DMF組成的去保護液脫除Fmoc保護基得到九肽片段樹脂Ⅱ：H-CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)-王樹脂。