[發明專利]恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒及使用方法

無效

• 申請號: 201410356799.8
• 申請日: 2014-07-24
• 公開（公告）號: CN104165991A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 路俊山;曾道平;陳蓮英;盧秋鴻
• 申請（專利權）人: 廣州萬聯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明涉及化學發光酶聯免疫檢測技術領域，特別涉及一種恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒及使用方法。

背景技術

諾沙星（Enrofloxacin，簡稱EF）是第一個畜禽專用的氟喹諾酮類藥物，1987年由德國拜耳公司首先研制成功。恩諾沙星化學名為1-環丙基-6-氟-4-氧代-1，4-2氫-7-(4-乙基-哌嗪基)-3-喹啉羧基，易溶于堿性溶液，在水、甲醇中微溶，乙醇中不溶。其結構式見式1.2。

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式1.2?恩諾沙星分子結構式

????恩諾沙星屬于抗生素類藥物，但其作用機理與以往的抗菌藥和抗生素不同。恩諾沙星直接作用于細菌核，破壞細菌的代謝和增殖，抗菌作用是磺胺類藥物的近千倍。因其抗菌譜廣、抗菌作用強、高效低毒、價格低廉，現已成為畜禽業和水產養殖業中最重要的抗菌類藥物之一。

一般認為恩諾沙星不滯留于動物組織，但大劑量應用時有一定的蓄積性。恩諾沙星可引起神經中毒、腎功能損傷、過敏反應、幼畜關節炎等毒副作用。近年來關于恩諾沙星在獸醫及人體臨床應用上的不良反應和耐藥性報道越來越多。恩諾沙星在動物性食品中的殘留直接威脅到人類健康，因此必須十分重視恩諾沙星在動物性食品中的殘留及耐藥性問題。

為了監控恩諾沙星在動物性食品中的殘留，各國陸續制定了恩諾沙星等藥物在牛、豬、禽的最高殘留限量，歐盟規定：恩諾沙星和環丙沙星量之和在動物雞肉、肝臟和腎臟中最大藥物殘留為30?μg/kg（NO508/1999）。我國農業部獸藥殘留指定動物性食品中恩諾沙星和環丙沙星量最高殘留量為100～300?μg/kg（農業部第235號公告，2002）。2007年5月，日本厚生勞動省通知我駐日使館，自5月30日起，將魚貝類恩諾沙星殘留限量標準由100?μg/kg調整為10?μg/kg。2012年3月，我國臺灣地區將動物性食品類恩諾沙星殘留限量標準調整為10?μg/kg。

目前恩諾沙星殘留引起了世界上許多國家和國際組織的高度重視，因此建立一種高度靈敏、低檢測限的檢測方法具有重要意義。

恩諾沙星殘留檢測方法通常采用微生物法、色譜法、毛細管電泳和免疫分析法等。微生物檢測法不需要復雜的提取和樣品準備過程，雖能檢測濃度較高的氟喹諾酮類藥物殘留，但微生物法的檢出限通常高于所規定的最高殘留限量，且易出現假陰性。色譜法靈敏度高，檢出限低，精密度好，但是由于這類方法前處理步驟比較繁瑣、對儀器設備和人員操作技能的要求較高，尚不適合于大量樣本的快速篩選，目前多作為少數樣本的確證性分析方法。相較于HPLC等儀器法，毛細管電泳法具有色譜柱不易污染、分析速度快、操作簡便、成本低等優點，但準確度和靈敏度不及HPLC法。

ELISA方法雖具有簡單、快速、靈敏的特點，但是在性能上還是著一些不足，如靈敏度偏低，反應時間過長等問題。因此，建立一種簡單、可靠、特異、敏感、快速有效的檢測方法有很大的實際意義。化學發光免疫分析（CLIA）是化學發光和免疫分析結合的產物,將發光物質直接標記到抗原或抗體上,與抗體或抗原發生特異性免疫反應后，通過測定標記物的化學發光強度確定被測抗體或抗原的含量。因為該體系不僅保留了酶聯免疫分析的主要優點，并且具備化學發光法的高靈敏度，在檢測靈敏度、特異性、準確度及精密度方面均可與放射性免疫分析相媲美，所需原料價格較低，發光增強劑的種類多，檢測儀器普及，易于操作，具有檢測范圍寬、靈敏度高、分析速度快、價廉經濟等優點，是免疫分析的重要發展方向，在醫學、環境、食品分析等方面具有廣闊的應用前景。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒。

本發明的另一目的在于提供上述恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒的使用方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，包括包被有恩諾沙星抗原的化學發光酶標板，恩諾沙星標準品，恩諾沙星酶標抗體，化學發光液和洗滌液；所述的恩諾沙星抗原為培氟沙星與卵清蛋白（OVA）的偶聯物，恩諾沙星抗原的包被濃度為0.5?mg/L。

所述培氟沙星的結構如式（Ⅰ）所示。

???????????????式（Ⅰ）

優選地，所述的化學發光酶標板優選為96孔可拆不透明白色發光板。

優選地，所述包被恩諾沙星抗原的包被液優選為將1.69g碳酸鈉和?2.95g碳酸氫鈉溶于1L雙蒸水中得到。