[發明專利]一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法

有效

• 申請號: 201410356326.8
• 申請日: 2014-07-24
• 公開（公告）號: CN104165941A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 張梅;彭學東;趙金召;祁法娟
• 申請（專利權）人: 張家港威勝生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 常州市維益專利事務所 32211
• 代理人: 王涵江

技術領域

本發明涉及一種測定蒿乙醚含量及有關物質的高效液相色譜法，屬于藥物分析領域。

背景技術

蒿乙醚(結構式見附圖1)是一種衍生自黃花蒿的抗瘧化合物。分子式：C₁₇H₂₈O₅，白色結晶或結晶性粉末。蒿乙醚為二氫青蒿素的乙醚衍生物，其已經進行了廣泛的臨床前、動物和毒理學研究以及為藥物調控，目前已被證實具有前景的活性，并且蒿乙醚可治療無并發癥的瘧疾，有嚴重并發癥的瘧疾、腦瘧疾和多藥性瘧疾。而且蒿乙醚比青蒿素更有效，其表現出清除率更快的殺裂繁體作用、沒有副作用的短的發熱清除時間和低的復發率，對瘧原蟲無性體有較強的殺滅作用，能迅速控制癥狀。世界衛生組織(WHO)也已經將蒿乙醚作為治療生命的抗瘧藥物。但是對于蒿乙醚原料藥中蒿乙醚含量及有關物質的測定目前卻少有研究，《國際藥典》2011版對蒿乙醚的含量和相關物質的測定是采用高效液相色譜法，色譜條件里的波長為210nm，流動相選用乙腈-水(62:38)等度洗脫。就國際藥典檢測蒿乙醚含量和相關雜質的方法中，等度洗脫不能完全分離蒿乙醚原料中的有關物質，對于蒿乙醚純度和有關物質的含量檢測存在誤差，并且該檢測方法使蒿乙醚樣品的色譜峰存在拖尾現象，拖尾因子T＝1.2不符合中國藥典2010版規定的T＝0.95～1.05。為了解決上述問題本發明提供的檢測方法是采用乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，建立一種新的蒿乙醚原料藥中蒿乙醚含量和有關物質的檢測方法，該檢測方法使色譜峰分離效果很好，分離度大于1.5符合中國藥典2010版標準，并且色譜峰無拖尾現象，拖尾因子T＝0.98符合中國藥典2010版的規定。所以該檢測方法對蒿乙醚原料藥的質量控制和雜質分析具有重要的應用價值。

發明內容

本發明經多次精密試驗提供一種更準確、高效的測定蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法，用于蒿乙醚原料藥的質量控制。為達到目的，本發明采用了如下技術方案：

本發明的一個具體的實施例中，本發明采用Agilent高效液相色譜儀測定蒿乙醚含量和有關物質，其選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫。

本發明又一個具體的實施例中，十八烷基鍵合硅膠色譜填料顆粒度為3-5μm，優選4.6μm，色譜柱的長度為150mm或250mm，優選250mm。

本發明再一個具體的實施例中，所述乙腈-水梯度洗脫的體積比為70％：30％(0min)，70％：30％(25min)，85％：15％(35min)，70％：30％(45min)。

本發明再一個具體的實施例中，利用DAD檢測器進行190nm--400nm全波長掃描(圖譜見圖5)，結果蒿乙醚在190-250nm范圍處有較大吸收，最大吸收波長為216nm，此波長下蒿乙醚的相關物質也有較好的吸收，因此選擇216nm作為蒿乙醚含量和有關物質測定的檢測波長。

本發明再一個具體的實施例中，利用標準品溶液多次進樣來確定進樣量，進樣精密度試驗次數為6次，所得最佳進樣量為20μl。

本發明還一個具體的實施例中，所述流動相的流速為0.5-1.2ml/min，優選1ml/min，其特點在于選用上述流速所得蒿乙醚樣品有很好分離，樣品分離度均大于1.5，符合中國藥典2010版的規定。

本發明提供的一種HPLC法測定蒿乙醚有關物質的方法，其包括以下步驟：

標準品溶液配制：取蒿乙醚標準品適量，用乙腈溶解并定容，配制成蒿乙醚濃度為5mg/ml的標準品溶液。

供試品溶液配制：取蒿乙醚原料藥適量，用乙腈溶解并定容，配制成蒿乙醚濃度為5mg/ml的供試品溶液。

對照品溶液配制：取上述蒿乙醚標準品溶液1ml置于200ml容量瓶，用乙腈稀釋至定容，配制成蒿乙醚濃度為0.025mg/ml對照品溶液。

附圖說明

圖1為蒿乙醚結構式

圖2為蒿乙醚供試品液相色譜圖

圖3為蒿乙醚標準品液相色譜圖

圖4為蒿乙醚對照品液相色譜圖

圖5為蒿乙醚檢測波長掃描圖譜

具體實施方式

色譜條件：

采用Agilent高效液相色譜儀，用色譜柱C₁₈(4.6x250mm?5μm)，以乙腈-水梯度洗脫，洗脫體積比為70％：30％(0min)，70％：30％(25min)，85％：15％(35min)，70％：30％(45min)，檢測器為DAD檢測器，檢測波長216nm，流速為1ml/min，進樣量為20μl。