[發明專利]一種制備可降解載藥涂層支架的方法

有效

• 申請號: 201410355973.7
• 申請日: 2014-07-24
• 公開（公告）號: CN104083805A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 宋春莉;李倩;劉斌;刁鴻英;趙麗艷;張基昌;于雲鵬;史永峰;王冠;王金鵬
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61L31/08
• 分類號: A61L31/08;A61L31/10;A61L31/16
• 代理公司: 長春市四環專利事務所(普通合伙) 22103
• 代理人: 鞠傳龍

1.一種制備可降解載藥涂層支架的方法，其特征在于：其具體方法如下所述：

第一步、預處理：先用拋光機將鋼片拋光至鏡面，然后將拋光后的鋼片用去污粉清洗，之后分別用丙酮、乙醇超聲清洗，最后用去離子水超聲清洗；然后制備多巴胺和肝素縮合形成的化合物的凍干物；鋼片及凍干物紫外線滅菌；三羥甲基氨基甲烷緩沖液的配置：Tris堿0.121加80ml?Milli-Q水溶解，用1M鹽酸調節PH值為8.5，定容至100ml，驗證PH值，滅菌，肝素鈉溶液配置：3mg/ml肝素鈉的Milli-Q水溶液100ml，用0.1M?NaOH及1％醋酸調節pH值為4.2，配好的肝素鈉溶液，滅菌；

第二步、將第一步中制備的凍干物溶于三羥甲基氨基甲烷緩沖液中，配好的溶液中保證多巴胺濃度為4mg/ml；取48孔板，每孔中放置配置好的溶液，用鑷子每孔放1枚鋼片，結束鋼片上多巴胺的聚合反應：將鋼片自溶液中取出，置于新的48孔板中，Milli-Q水清洗，清洗后氮氣吹干；

第三步、鋼片的包被：將第二步中制得的鋼片進行血管內皮生長因子和肝素的包被，包被層數為1-10層；具體包被過程為：將血管內皮生長因子溶于pH值為7.4的PBS緩沖液中，配置成100ug/ml溶液，將制得的鋼片浸入血管內皮生長因子溶液中，4℃條件下反應，12小時后取出鋼片，去離子水沖洗，氮氣吹干，制得的鋼片表面生成有血管內皮生長因子層，血管內皮生長因子的等電點為8.5，通過調節pH值能夠使血管內皮生長因子溶液和肝素鈉溶液分別帶正電、負電，然后一層肝素一層血管內皮生長因子再一層肝素這樣層層靜電吸附直至所需層數；

第四步、包被金黃色葡萄球菌A蛋白：將金黃色葡萄球菌A蛋白中加入PBS，配置成1mg/ml溶液，再進行稀釋，最終配置成0.1mg/ml金黃色葡萄球菌A蛋白溶液，將上步中獲得的支架置于金黃色葡萄球菌A蛋白溶液中，4℃冰箱中靜置24小時，將鋼片取出用pH值為7.4的PBS溶液清洗3次，氮氣吹干；

第五步、進行封閉：將上步中被金黃色葡萄球菌A蛋白包被后的支架浸入10mg/ml牛血清白蛋白中，4℃下靜置封閉，取出用PBS清洗，氮氣吹干，然后配置CD34抗體溶液，將封閉后的支架浸入CD34抗體溶液中，4℃條件下反應12小時，取出用PBS清洗，常溫干燥；進一步，進行CD34抗體的熒光標記和表征：包被抗體CD34的支架中取一枚進行熒光標記，之前用兔血清封閉，異硫氰酸熒光素標記鼠抗兔IgG抗體配置成混合溶液，將包被抗體CD34的支架與標記物37℃條件下共浴1小時，常溫下過夜干燥，固定于載玻片上，送檢免疫熒光。