[發明專利]一種測定水產品中的孔雀石綠酶聯免疫吸附法

在審

• 申請號: 201410354543.3
• 申請日: 2014-07-24
• 公開（公告）號: CN105277687A
• 公開（公告）日: 2016-01-27
• 發明（設計）人: 洪霞;鄧榕榕
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種水產品中孔雀石綠含量的檢測方法，其特征是，包括以下步驟：

(1)溶液的配制

a.包被液的配制：將碳酸鈉、碳酸氫鈉配制成pH7.0-8.0的溶液，低溫保存；

b.洗滌液的配制：將氯化鈉、十二水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀及吐溫20配制成pH7-8的溶液，低溫保存；

c.終止液的配制：配制10-15％的濃硫酸；

d.封閉液的配制：將氯化鈉、十二水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、吐溫20及牛血清白蛋白配制成pH7-8的溶液，低溫保存；

e.底物溶液的配制：將磷酸氫二鈉、檸檬酸、H₂O₂及四甲基聯苯胺配制成溶液；

(2)抗體固定

將孔雀石綠多克隆抗體用包被液稀釋，以每孔100μL加入酶標板中，同時設立正常血清稀釋液的陽性對照，低溫過夜保存；將孔中液體倒盡，加入洗滌液，保留3min，再倒盡，如此重復洗滌多次；每孔中添加100μL封閉液，37℃，保留1h；將孔中液體倒盡，加入洗滌液，保留3min，再倒盡，如此重復洗滌多次；

(3)免疫反應

用封閉液稀釋待測樣品溶液后加入酶標板孔中，100μL/孔，37℃，保留1-2h，孔中液體倒掉，加入洗滌液，保留3min，倒盡，如此重復洗滌多次；用封閉液稀釋酶標孔雀石綠溶液后加入孔中，100μL/孔，37℃，保留1-2h，孔中液體倒掉，加入洗滌液，保留3min，倒盡，如此重復洗滌多次；加入底物溶液，100μL/孔，避光，37℃，10-15min；加入終止液終止反應，100μL/孔；

(4)檢測信號的獲得

a.用酶標儀檢測酶標板孔中的液體OD值，根據OD值判斷樣品中孔雀石綠的含量，根據孔雀石綠含量的標準曲線可計算出樣品中孔雀石綠的含量大小；

b.按照權利要求1所述的水產品中孔雀石綠含量的檢測方法，其特征是：所述重復洗滌的次數為三次；

c.按照權利要求1所述的水產品中孔雀石綠含量的檢測方法，其特征是：所述低溫為4℃。