[發明專利]利用L-乳酸合成S-1,2-丙二醇的重組大腸桿菌及其構建方法

有效

• 申請號: 201410354028.5
• 申請日: 2014-07-23
• 公開（公告）號: CN104109651B
• 公開（公告）日: 2016-11-16
• 發明（設計）人: 管祥辰;王麗敏;于波
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P7/18;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種利用L-乳酸合成S-1,2-丙二醇的重組大腸桿菌A的制備方法，包括如下(1)-(3)的步驟：

(1)將大腸桿菌BW25113-△poxB中的lldD基因、adheE基因和ackA-pta基因分別替換為3-羥基丙酸脫氫酶的編碼基因、輔酶A依賴型琥珀酸半醛脫氫酶的編碼基因和丙酰輔酶A轉移酶的編碼基因，得到的重組菌記為BWPDO1；

所述大腸桿菌BW25113-△poxB為將大腸桿菌BW25113野生型中的poxB基因敲除后所得的菌株；

(2)敲除步驟(1)獲得的BWPDO1的ldhA基因和dld基因，得到的重組菌記為BWPDO2；

(3)向步驟(2)獲得的BWPDO2中導入丙酮酸脫羧酶的編碼基因和NAD依賴型乙醛輔酶A脫氫酶的編碼基因，得到的重組菌記為BWPDO3；所述BWPDO3即為所述重組大腸桿菌A。

2.一種利用L-乳酸合成S-1,2-丙二醇的重組大腸桿菌B的制備方法，包括權利要求1中的步驟(1)和步驟(2)；所述步驟(2)中獲得的所述BWPDO2即為所述重組大腸桿菌B。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，所述3-羥基丙酸脫氫酶的氨基酸序列為序列表中序列12；所述輔酶A依賴型琥珀酸半醛脫氫酶的氨基酸序列為序列表中序列13；所述丙酰輔酶A轉移酶的氨基酸序列為序列表中序列14；或

步驟(3)中，所述丙酮酸脫羧酶的氨基酸序列為序列表中序列15；所述NAD依賴型乙醛輔酶A脫氫酶的氨基酸序列為序列表中序列16。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，所述3-羥基丙酸脫氫酶的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列1的第116-994位；所述輔酶A依賴型琥珀酸半醛脫氫酶的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列2的第326-1714位；所述丙酰輔酶A轉移酶的編碼基因的核苷酸序列為序-列表中序列3的第326-1900位；或

步驟(3)中，所述丙酮酸脫羧酶的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列4的第1001-2671位；所述NAD依賴型乙醛輔酶A脫氫酶的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列4的第3-953位；或

步驟(1)中，所述poxB基因的核苷酸序列為序列表中序列18所示；所述lldD基因的核苷酸序列為序列表中序列5；所述adheE基因的核苷酸序列為序列表中序列6；所述ackA-pta基因的核苷酸序列為序列表中序列7；或

步驟(2)中，所述ldhA基因的核苷酸序列為序列表中序列8；所述dld基因的核苷酸序列為序列表中序列9。