[發明專利]杜仲葉中分離的黃酮類化合物作為sEH抑制劑的應用

在審

• 申請號: 201410353804.X
• 申請日: 2014-07-23
• 公開（公告）號: CN104173329A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 高錦明;白猛猛;田鈞勉;張康健;雷鳴;宗時春
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61K31/7048;A61P9/00;C07D311/30;C07D311/40;C07H17/07;C07H1/08
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 史玫

技術領域

本發明涉及藥物化學，具體涉及從杜仲葉中分離得到七個黃酮類化合物及其被驗證為可溶性環氧化物水解酶的抑制劑。

背景技術

心血管疾病已經成為嚴重威脅人類健康的疾病之一。隨著科技的發展，人們在治療心血管疾病方面已經取得了很大進展。然而，每年仍有大量心血管疾病患者因無法得到有效治療而去世。故此，人類對于心血管疾病新的治療途徑和藥物具有迫切需求性。

可溶性環氧化合物水解酶(soluble?epoxide?hydrolase，sEH)是哺乳動物體內廣泛存在的一種酶。近來研究發現sEH與高血壓、終末器官損傷、心肌肥厚及缺血/再灌注損傷關系密切，極有可能成為一種預防和治療心血管疾病的新靶點(Hum?Mol?Genet，2006，15(10):1640-1649；J?Int?Pathol?Clinical?Med，2008,28(5):443-446)。基于此，抑制sEH酶活性可以作為緩解和治療高血壓、終末器官損傷以、心肌肥大、糖尿病等多種心血管疾病以及抗炎鎮痛的潛在治療途徑。

基于尿素的可溶性環氧化物水解酶抑制劑在過去的十多年中有快速發展。相關研究結果表明這類成分具有抗高血壓、抗炎以及保護心臟、腎臟和大腦免受損傷的功效。然而溶解性差，降解迅速等特點也在很大程度上限制了此類化合物的應用前景。此外，部分sEH抑制劑可以在肝臟微粒體中被快速代謝掉。后來，人們對基于尿素的sEH抑制劑從藥代動力學和生物利用度兩個角度進行了改進，但仍然存在諸如吸收緩慢、半衰期短和水溶性差等缺點。

1951年，前蘇聯研究杜仲可調節血壓，1976年，美國威斯康辛大學教授研究認為杜仲降血壓的機理是杜仲中松脂素二葡萄糖苷的作用。此后，日本人研究發現杜仲葉中的京尼平苷和京尼平苷酸為杜仲葉降血壓的有效成分；我國科學家研究認為杜仲葉的藥用有效成分與皮其本相同、藥用功能基本一致及杜仲葉降血壓的機理是其有效成分對冠狀動脈血管的擴張作用。至今未見杜仲葉中的可溶性環氧化物水解酶抑制劑的有關報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，目的是提供黃酮類化合物作為可溶性環氧化物水解酶抑制劑的應用。

本發明提供的黃酮類化合物作為sEH抑制劑的應用，所述黃酮類化合物的結構式如式Ⅰ所示：

式1中；

上述類黃酮化合物的提取原料為杜仲葉。

本發明的另一目的是提供了上述黃酮類化合物用于制備預防和治療心血管疾病藥物的應用。

本發明從杜仲葉中分離得到具有可溶性環氧化物水解酶抑制活性的七個黃酮類成分。此類成分具有水溶性好，毒副作用小、含量高、分布廣泛等優點。活性測試結果顯示杜仲葉黃酮可以抑制sEH活性。基于可溶性環氧化物水解酶的作用原理，本發明提供的杜仲葉中可溶性環氧化物水解酶抑制劑，可以用于預防和治療多種心血管疾病。

附圖說明

圖1是杜仲葉中黃酮化合物于37℃下對于可溶性環氧化物水解酶(sEH)水解底物PHOME的影響；

圖2EU-26米氏方程雙倒數曲線；

圖3RU-40米氏方程雙倒數曲線；

圖4EU-26Dixon曲線；

圖5RU-40Dixon曲線；

圖6為本發明的黃酮類化合物提取工藝圖。

具體實施方式

如圖6所示，本發明提供的黃酮類化合物的制備方法如下：

(1)新鮮采摘的杜仲葉，于室內充分陰干；

(2)粉碎后使用濃度為50％的甲醇滲漉提取，直到流出液無色；

(3)合并提取液，減壓濃縮得浸膏；

(4)浸膏用純水按照kg/L1:10混懸，使用等體積正丁醇進行萃取，3次。將水相和正丁醇相分別濃縮，回收溶劑；

(5)水相按質量比1:3與100-200目硅膠拌樣，氯仿：甲醇(5:1至1:1)作為流動相進行洗脫。收集硫酸乙醇顯黃色的部分，合并；

(6)繼續使用AB-8大孔吸附樹脂、硅膠、反相硅膠、凝膠以及HPLC等分離技術進行純化。最終分離得到EU-6和EU-7；

(7)所得正丁醇相使用少量水溶解，使用AB-8大孔吸附樹脂進行分離；依次使用水、10％甲醇、30％甲醇、50％甲醇、75％甲醇和100％甲醇進行洗脫。收集30％至75％部分，分別使用硅膠、凝膠、反相硅膠以及HPLC等技術進行分離純化；最終分離得到Eu-18、EU-23、EU-26、EU-40以及EU-43；