[發明專利]一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點Satt318及其應用

在審

• 申請號: 201410353557.3
• 申請日: 2014-07-24
• 公開（公告）號: CN104673788A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 陳慶山;劉春燕;辛大偉;朱榮勝;胡振幫;蔣洪蔚;齊照明;孫亞男;韓雪
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛

技術領域

本發明涉及一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點Satt318及其應用，屬于大豆遺傳技術領域。

背景技術

我國主要糧食作物中，只有大豆的單產低于世界平均水平，約為世界大豆平均單產的80％左右。我國大豆的單產每畝115kg左右，美國、巴西單產可達180kg。對于大豆產量的品種培育主要依靠育種者的專業經驗，后期篩選工作周期長。尤其對大豆百粒重的分子標記研究還停留在比較初級的水平，不能應用于育種實踐。所以提高大豆的單產對我國大豆生產具有重要意義。

控制大豆合適的百粒重是實現大豆高產的有效辦法。但是，目前對可以用于大豆育種過程中父母本篩選的標記位點的報道較少，對于實現在育種前期對親本或者雜交后代的百粒重遺傳背景進行選擇的手段和方法還比較有限。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種輔助鑒定大豆百粒重遺傳特性的專用引物對，所采取的的技術方案如下：

本發明的一個目的在于提供一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點，所述標記位點位于大豆B2連鎖群上，緊密連鎖標記為SSR引物Satt318。

所述標記位點的對應專用引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示。

所述標記位點應用于大豆的遺傳育種，具體用于輔助鑒定和篩選大豆的百粒重遺傳特征。

本發明的另一個目的在于提供一種利用所述標記位點鑒定大豆百粒重遺傳特征的方法，

步驟如下：?

1)提取新鮮待測大豆樣品中的基因組DNA；

2)以步驟1)所得的待測大豆樣品基因組DNA為模板，利用Satt318專用引物進行PCR擴增，所述引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示；

3)通過SSR電泳檢測步驟2)所獲得的擴增產物，銀染顯影后擴增產物中含有750bp?DNA片段的待測大豆為候選具有減小百粒重遺傳性狀的大豆。

所述方法用于鑒定大豆的百粒重遺傳特征。

本發明的另一目的在于提供一種利用所述標記位點篩選大豆百粒重遺傳特征的方法，該方法的步驟如下：

1)提取新鮮待測大豆樣品中的基因組DNA；

2)以步驟1)所得的待測大豆樣品基因組DNA為模板，利用Satt318專用引物進行PCR擴增，所述引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示；

3)通過SSR電泳檢測步驟2)所獲得的擴增產物，銀染顯影后擴增產物中含有750bp?DNA片段的待測大豆為候選具有減小百粒重遺傳性狀的大豆。

所述方法用于篩選大豆的百粒重遺傳特征。

所述PCR擴增，共35個循環，循環開始前先于95℃下處理5min，然后進入循環，所述循環的溫度和延伸時間程序是：先94℃30s，然后60℃30s，最后72℃1min，循環結束后再于72℃下處理10min。

具體而言，本發明提供的SSR標記在鑒定大豆百粒重方面的應用，是根據大豆SSR位點設計的引物，利用引物的產物帶型特征對大豆品種進行分子鑒定。

本發明所述大豆百粒重遺傳特征是在251份大豆種質資源和以北豆5號為母本(父本包括多馬卡·托利薩、坡黃、Harosoy、綠75、中特1號、NOVA、Century、煙黃3號、東農163、杜納吉卡、Amsoy、中豆27、95-5383、艾卡166、大明白豆子、瑞豐2號、Biogedulote、中黃4號、天鵝蛋ZDD02114和東山69)的遺傳群體中，均得到了證實。

本發明有益效果如下：

由于在大豆中與百粒重相關的基因還沒克隆出來，利用標記位點對大豆育種進行分子輔助選擇是一個比較經濟的方法，尤其是對百粒重進行直接選擇。本發明的方法克服了常規育種中因表型選擇易受環境因素干擾而導致育種效率低等問題，可以利用Satt318標記的專用引物對對大豆百粒重遺傳特性進行早期世代選擇而縮短育種周期，從而較快的篩選出籽粒合適的大豆材料。本發明可用于大豆的育種，以提高育種的效率和大豆的產量和質量。

附圖說明

圖1為大豆百粒重QTL一致性圖譜。

圖2為Satt318在B2連鎖群上的位置。

圖3為卡方分析與T-測驗的資源等位基因的分層分析。

圖4為等位基因的在資源中效應分析。

圖5為關鍵等位基因資源和群體中的變化率；