[發明專利]一種黃毛藜豆的組培快繁方法

無效

• 申請號: 201410352660.6
• 申請日: 2014-07-24
• 公開（公告）號: CN104137775A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 張全琪;倪燕妹;鄭杰;陳海堅;黃志;王力前
• 申請（專利權）人: 廣東農墾熱帶作物科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 茂名市穗海專利事務所 44106
• 代理人: 李好琚

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種黃毛藜豆的組培快繁方法。

背景技術

黃毛藜豆（Mucuna?bracteata?DC.?ex?Kurz），屬豆科（Leguminosae）藜豆屬（Mucuna）多年生纏繞藤本，生于海拔600-2000米的林中或草地、山坡、路邊或溪旁，主要分布于馬來西亞、緬甸、泰國、越南等東南亞國家，我國云南和海南也有零星分布。其寄生根瘤菌具有生物固氮功能，且在豐富土壤營養物質、改良土壤物理性狀和提高土壤保水保肥性能等方面具有重要作用，因此，在巴西橡膠樹、油棕等經濟作物的種植過程中常以黃毛藜豆作為覆蓋作物。

近年來，隨著我國經濟社會的發展，傳統農業的種植和耕作模式已經不能適應現代社會的發展需要，推廣應用綠肥套種技術建設生態膠園、油棕園、果園，建設優質、高產、低耗的農業生態系統，走生態農業道路是現代農業的發展方向之一。黃毛藜豆作為一種理想的綠肥覆蓋植物，被廣泛應用于橡膠、油棕等多種重要經濟作物的種植過程中，對其種苗的需求量也急劇增加。然而，由于黃毛藜豆存在種子不易收集，且種子在自然條件下發芽率低等問題，種苗的需求量已經呈現出明顯的供不應求趨勢。通過組織培養途徑實現黃毛藜豆的人工繁殖可滿足日益增長的市場需求，目前，有關黃毛藜豆組織培養形成再生植株尚未見報道。本發明以黃毛藜豆無菌苗子葉節為外植體誘導叢生芽，最終實現植株再生。

發明內容

本發明的目的是解決黃毛藜豆種子不易收集，且自然條件下發芽率低，而目前生產上對其種苗的需求量急劇增加的問題，通過采用生物技術手段，提供一種黃毛藜豆的組培快繁方法，以建立一個高效的黃毛藜豆組培快繁技術體系。

本發明解決所述技術問題的方案是：一種黃毛藜豆的組培快繁方法，它包括以下步驟：

1）黃毛藜豆外植體的采集與消毒：采集黃毛藜豆成熟、健康的種子，用清水洗凈后置于超凈工作臺上，先用體積百分比濃度70%～75%乙醇處理20～40s，無菌水沖洗4～5遍后用0.05?%～0.15?%的HgCl₂水溶液浸泡滅菌10～20min，再用無菌水沖洗4～5遍，無菌濾紙吸干表面水分，用手術刀在種背部輕輕劃出一道小口，接種到附加30g/L蔗糖、6.5g/L瓊脂，pH為5.8，且已在溫度121℃、壓力1.1?kg·cm^-2的條件下滅菌20?min的MS培養基上；接種后放在溫度為27℃±1℃，光源為日光燈，光照度為2000～3000?lx，光照時間為12h·d^-?1的條件下進行培養；

2）黃毛藜豆叢生芽的誘導與增殖：種子經過3～5d的培養后胚根伸出，10～12?d?后，上胚軸伸長，兩片子葉逐漸展開，分別將子葉展開而第一片真葉尚未展開的無菌幼苗的子葉節切下后接種到已在溫度121℃、壓力1.1?kg·cm^-2的條件下滅菌20?min的誘導叢生芽培養基中，接種后放在溫度為27℃±1℃，光源為日光燈，光照度為2?000～3000?lx?，光照時間為12?h·d^-?1的條件下進行培養；其中，該培養基配方為：MS+?NAA?0.05mg?/?L+?6-BA?1.5?mg?/?L，附加30g/L蔗糖和6.5g/L瓊脂，該培養基pH為5.8，其中MS為基本培養基；

?3）黃毛藜豆壯苗生根培養：選擇健壯的、植株高度在5～8cm的單個叢生芽，切下后接種到已在溫度121?℃、壓力1.1?kg·cm^-2的條件下滅菌20?min的壯苗生根培養基中，接種后的叢生芽小植株放在溫度為27℃±1℃，光源為日光燈，光照度為2?000～3?000?lx?，光照時間為12?h·d^-?1的條件下進行培養；其中，該培養基配方為：1/2?MS+?NAA?0.5?mg/?L，附加30g/L蔗糖和6.5g/L瓊脂，該培養基pH為5.8，其中1/2MS為基本培養基；

4）黃毛藜豆的煉苗與移栽：取培養30～50?d，根系發達，植株高為10～15?cm的黃毛藜豆組培苗，預先室內進行開蓋煉苗3?d，洗凈根部附著的培養基，放入0.05～0.15%多菌靈水溶液中浸泡消毒10～20?min后，移栽到預先消毒處理過的沙床中，澆水淋透，適當保濕遮蔭。