[發明專利]蘇云金芽孢桿菌及其應用

在審

• 申請號: 201410351686.9
• 申請日: 2014-07-22
• 公開（公告）號: CN104140941A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 趙謀明;郇惠杰;趙強忠;崔春
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/54;C12R1/07
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

技術領域

本發明涉及深海中微生物篩選及發酵領域，具體涉及蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）SWJS07及其液體發酵產蛋白酶的方法。

背景技術

蛋白酶（protease）是一類非常重要的水解酶，是三大工業用酶之一，銷售額約占全球酶制劑市場的60%。其中，來源于細菌的蛋白酶比來源于動物和真菌的更具有開發前景，因為，微生物無處不在，可以在有氧和無氧環境中生存，且生長速度快，它們的代謝產物――微生物酶，可以降解所有天然化合物及大多數人造化學品。所以微生物酶已成為人們獲得工業用酶的重要來源，其中微生物來源的蛋白酶占據了世界市場的20%，主要用于蛋白質深加工、皮革、醫藥、洗滌劑、飼料等行業中。

由于海洋環境的特殊性（高鹽、高壓、低溫、營養稀缺等），使海洋微生物與陸生微生物在代謝系統與防御體上有著明顯的差異，其所擁有的獨特遺傳因子與代謝途徑，能夠產生化學結構多樣、新穎，生理活性獨特的代謝產物。是獲取新型酶，如極端酶，特別是耐鹽、耐堿、耐熱、耐冷蛋白酶的重要資源庫。此外，人類對生物活性物質的需求越來越迫切，開發新穎的活性物質也成為當前研究的熱點。但由于我們對深海微生物的特殊生長需求以及生理特性的了解有限，所以我們能在現有的實驗室條件下分離進行培養的還比較少。目前，在100萬種以上的海洋微生物中，所研究和鑒定過的海洋微生物約占總數的5%，已發現的活性物質僅約占總數的1%。這些都充分說明了海洋微生物具有深遠的開發意義和巨大的開發潛力。

長期以來，蘇云金芽孢桿菌都被定位于生物農藥（對人、畜、植物無毒、無致病性），而關于其生長過程中所產代謝產物具有的新功能的研究報道卻較少，而深海來源產蛋白酶的蘇云金芽孢桿菌尚未見報道。本發明中所涉及的蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）SWJS07遺傳性質穩定，所產中性蛋白酶活力達1000U/mL以上，在新型酶制劑的開發及工業應用中具有重要意義。

發明內容

本發明目的之一是提供了一種蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）。

本發明目的之二是提供了一種蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）SWJS07在液體發酵生產蛋白酶中的應用。

本發明中可生產蛋白酶的深海菌株為蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）SWJS07，該菌于2013年１１月１日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中科院微生物研究所，保藏編號為CGMCC?No.8423。

對保藏編號為CGMCC?No.8423的菌株進行形態學及生理生化鑒定，有以下特征：

表1?菌株形態特征

注：“+”表示90%以上菌株呈陽性，“-”表示90%以上菌株呈陰性，表2同。

表2?生理生化特征

?保藏號為CGMCC?No.?8423菌株經16S?rDNA鑒定，測得基因片段長度為1295bp，具體基因序列見序列表1。將獲得的基因序列輸入Genbank，應用Blast程序將獲得的基因序列與數據庫中基因序列進行對比。結果顯示與蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）的16S?rDNA序列的同源性為99%。將此結果結合菌株形態學及生理生化鑒定特征，確定該菌為蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）。

保藏號為CGMCC?No.8423菌株通過單因素試驗對其液體發酵產蛋白酶條件進行了優化。

本發明具有如下優點和技術效果：

本發明公開了蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）SWJS07及其產蛋白酶的條件，其培養、發酵條件簡單，遺傳性質穩定。由于該菌株來源于深海，所分泌蛋白酶具有特殊的性質。并且長期以來，蘇云金芽孢桿菌都被定位于生物農藥（對人、畜、植物無毒），而關于其生長過程中所產代謝產物具有的新功能的研究報道卻較少，在開發新型深海菌株及酶制劑的研究中，具有重要意義。

附圖說明

圖1為不同發酵溫度對蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）SWJS07產蛋白酶的影響。