[發(fā)明專利]一種基于量子點(diǎn)的蛋白質(zhì)核殼印跡微球的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410351302.3
• 申請日: 2014-07-22
• 公開（公告）號(hào): CN104075925A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳令新;張忠;李金花
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N21/64
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種基于量子點(diǎn)的蛋白質(zhì)核殼印跡微球的制備方法，其特征在于：用改進(jìn)的法合成表面帶有氨基的二氧化硅納米粒子，同時(shí)合成表面帶有羧基的CdTe量子點(diǎn)，將量子點(diǎn)接枝到二氧化硅表面，采用溶膠凝膠法與表面印跡技術(shù)在二氧化硅的表面形成蛋白質(zhì)印跡層，洗脫掉模板得到基于量子點(diǎn)的蛋白質(zhì)核殼印跡微球。

2.按權(quán)利要求1所述的基于量子點(diǎn)的蛋白質(zhì)核殼印跡微球的制備方法，其特征在于：

以溶膠凝膠法在經(jīng)過量子點(diǎn)改性的二氧化硅表面進(jìn)行核殼印跡，以藻藍(lán)蛋白為模板分子，將分子印跡作為選擇識(shí)別單元與量子點(diǎn)作為信號(hào)單元相結(jié)合，通過表面吸附作用實(shí)現(xiàn)量子點(diǎn)的熒光減弱/猝滅，洗脫掉模板分子，即得蛋白質(zhì)核殼印跡微球。

3.按權(quán)利要求1所述的基于量子點(diǎn)的蛋白質(zhì)核殼印跡微球的制備方法，其特征在于：

所述的蛋白質(zhì)核殼印跡微球的制備：

a.納米級(jí)二氧化硅的合成：將乙醇和去離子水混合，再加入氨水作為催化劑，而后緩慢滴加乙醇和四乙氧基硅烷溶液的混合溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)后加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，即可得到納米級(jí)的二氧化硅粒子；

b.CdTe量子點(diǎn)的合成：將碲粉和硼氫化鈉混合，混合后加入乙醇，再加入去離子水，密閉加熱恒溫反應(yīng)，待用；同時(shí)把硝酸鎘溶解在去離子水中，并加入巰基乙酸進(jìn)行改性，而后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH?9-10，用氮?dú)獬酰粚⑸鲜鏊庙诜郛a(chǎn)物的上清液加入到上述改性后硝酸鎘溶液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流，即得到黃綠色的CdTe量子點(diǎn)；

c.二氧化硅表面接枝：上述合成的二氧化硅溶液，加入到2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液中，超聲振蕩使二氧化硅粒子完全分散開，然后緩慢依次滴加活化的量子點(diǎn)溶液，室溫避光攪拌反應(yīng)，使得量子點(diǎn)接枝到二氧化硅的表面；活化的量子點(diǎn)溶液為鹽酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺活化；

d.印跡殼層的制備：將上述接枝量子點(diǎn)的二氧化硅加入到磷酸鹽緩沖溶液中，超聲分散，加入模板分子藻藍(lán)蛋白和功能單體3-氨丙基三乙氧基硅烷，避光攪拌，使其充分結(jié)合，之后加入催化劑氨水和交聯(lián)劑四乙氧基硅烷，室溫反應(yīng)、洗滌，即形成印跡殼層；

e.模板分子的洗脫：將上述所得印跡殼層用曲拉通X-100溶液振蕩洗脫，去除模板分子藻藍(lán)蛋白，用去離子水離心清洗、干燥，即得到藻藍(lán)蛋白核殼印跡微球。

4.按權(quán)利要求3所述的基于量子點(diǎn)的蛋白質(zhì)核殼印跡微球的制備方法，其特征在于：所述步驟a.納米級(jí)二氧化硅的合成：將20-40mL的乙醇和40-60mL的去離子水混合，混合后加入8-12mL的氨水，而后滴加入20-30mL的乙醇和四乙氧基硅烷的混合溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4-8h，之后再加入3-6mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，攪拌反應(yīng)10-14h，用乙醇離心清洗3-6遍，最后將二氧化硅分散在40-60ml的乙醇中，即可得到納米級(jí)的二氧化硅粒子溶液；其中乙醇和四乙氧基硅烷按體積比為4:1混合。

5.按權(quán)利要求3所述的基于量子點(diǎn)的蛋白質(zhì)核殼印跡微球的制備方法，其特征在于：所述步驟b.CdTe量子點(diǎn)的合成：稱取35-40mg的碲粉和30-45mg的硼氫化鈉混合，混合后加入1-2mL的乙醇，再加入0.4-1.0mL的去離子水，密閉條件下在30-50℃恒溫反應(yīng)，反應(yīng)3-5h，至黑色的碲粉完全消失，上清液為淡紫色為止；同時(shí)把90-100mg的硝酸鎘加入到70-90mL的去離子水中，然后加入60-70μL的巰基乙酸，再用1mol/L的氫氧化鈉溶液將pH調(diào)到9-9.2，用氮?dú)獯?0-30min除氧，將碲粉產(chǎn)物的上清液1mL加入到硝酸鎘溶液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流1-3h，即可得到黃綠色的量子點(diǎn)。

6.按權(quán)利要求3所述的基于量子點(diǎn)的蛋白質(zhì)核殼印跡微球的制備方法，其特征在于：所述步驟c.二氧化硅表面接枝：取3-6mL納米級(jí)的二氧化硅溶液，加入40-50mL的pH為5-6的2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液，超聲8-12min使二氧化硅粒子完全分散開，然后恒壓滴加8-12mL量子點(diǎn)、4-8mL的20mg/mL的鹽酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺、4-8mL的10mg/mL的N-羥基琥珀酰亞胺溶液，室溫避光攪拌反應(yīng)4-8h，使得量子點(diǎn)接枝到二氧化硅的表面，將反應(yīng)產(chǎn)物分別用去離子水、pH＝7.5的0.01mol/L磷酸鹽緩沖溶液清洗3-5遍，將其分散在40-60mL的pH＝7.5磷酸鹽緩沖溶液中。