[發明專利]檢測塑化劑的化學發光免疫檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201410349858.9
• 申請日: 2014-07-23
• 公開（公告）號: CN105319352A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發明（設計）人: 洪霞;薛永來;邢海龍
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種檢測塑化劑的化學發光免疫檢測試劑盒，用于檢測白酒中的塑化劑含量或殘留量。屬于免疫學檢測領域。

背景技術

塑化劑是一種增加材料的柔軟性或是材料液化的添加劑。鄰苯二甲酸酯類塑化劑被歸為疑似環境荷爾蒙，其生物毒性主要屬雌激素與抗雄激素活性，會造成內分泌失調損害生物體生殖機能，包括升值率降低、流產、天生缺陷、異常的精子數、睪丸損害，還會引發惡性腫瘤、造成畸形嬰兒。

鄰苯二甲酸酯類塑化劑是一種有毒的化工業用塑料軟化劑，屬無色、無味液體，添加后可讓微粒分子更均勻散布，因此能增加延展性、彈性及柔軟度，常作為沙發、汽車座椅、橡膠管、化妝品及玩具的原料，屬于工業添加劑。

本發明通過特有的免疫動物制備具有高親和力、高特異性的塑化劑抗體，并采用酶標記抗體，建立一種可以檢測塑化劑的化學發光免疫試劑盒，將為白酒產品中塑化劑藥物留檢測提供新方法，對保證白酒產品安全提供重要的理論和實踐依據，維護白酒業健康發展具有重要意義。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明主要是利用抗原與抗體的特異性免疫反應的基本原理來實現的。化學發光免疫分析是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光法的高靈敏度和免疫分析法的高特異性。在整個反應過程中，樣品中塑化劑含量越高，反應體系中發光強度越弱；反之，樣品中塑化劑含量越少，發光強度越高。

本發明是一種檢測塑化劑的化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于含有以下成份：

1、包被有塑化劑-載體蛋白偶聯物的不透明白色酶標板；所述塑化劑-載體蛋白偶聯物是將塑化劑與載體蛋白通過混合酸酐法或碳二亞胺法偶聯得到，所述載體蛋白為人血清白蛋白、牛血清白蛋白、雞蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、塑化劑標準品；

3、塑化劑-過氧化物酶標記抗體：該成分為用過氧化物酶標記的塑化劑抗體，所述塑化劑抗體為單克隆抗體或多克隆抗體；

4、發光底物液：該發光底物液是以魯米諾貨異魯米諾為發光劑的化學發光底物液，分為A液和B液保存，在使用前按1:1混合使用；其中A液位發光增強劑加魯米諾貨發光增強劑加異魯米諾，B液為過氧化氫溶液或尿素過氧化氫溶液；

5、2倍濃縮稀釋液；

6、20倍濃縮洗滌液。

本發明中，所述的不透明白色酶標板為96孔的可拆卸或不可拆卸的不透明白色酶標板。

本發明中，所述的塑化劑標準品，由一系列不同濃度的塑化劑標準品組成，濃度為0.02~50μg/mL的濃度區間。

本發明中，所述的塑化劑-過氧化物酶標記抗體為用過氧化物酶標記的塑化劑抗體，如辣根過氧化物酶(HRP)標記的塑化劑抗體。

本發明中，所述的發光底物液為商品化的任一種以魯米諾貨異魯米諾為發光劑的化學發光底物液。

本發明中，所述所述2倍濃縮稀釋液，其成分為0.01mol/L，pH7.4的磷酸緩沖液、甘氨酸-HCl緩沖液或Tris-HCl緩沖液，使用前請按1：1稀釋（1份濃縮樣品稀釋液+1份去離子水）。

本發明中，所述20倍濃縮洗滌液，其包含0.05%吐溫-20，0.01mol/L的PBST，pH值范圍7.0-7.5之間，使用前請按1：19稀釋（1份濃縮稀釋液+19份去離子水）。

本發明的塑化劑的化學發光免疫檢測試劑盒應用于塑化劑的檢測時，檢測步驟為：

(1)預處理待測樣品，即將待測試的樣品處理為液體樣品，或者用有機溶劑提取待測樣品，氮氣吹干并將其復溶于樣品稀釋液工作液中；

(2)將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻；

(3)取包被塑化劑抗原的酶標板，加標準品/待測樣品50μL/孔到對應的微孔中,標準品和樣品每個濃度做兩個平行實驗；

(4)加入塑化劑抗體工作液，50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應45min；

(5)小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液250μL/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）；

(6)加入發光底物液混合液(A液與B液在使用前按1:1混合)100μL/孔，輕輕振蕩混勻，混合好后在化學發光檢測儀內檢測發光強度(RLU)；

(7)檢測結果的計算：用所獲得的標準溶液和試樣溶液發光值與空白溶液的比值進行計算。見下式：

相對發光強度=RLU/RULmax

式中：