[發明專利]檢測阿德呋啉的化學發光免疫檢測試劑盒在審

申請號：	201410349794.2	申請日：	2014-07-22
公開（公告）號：	CN105277701A	公開（公告）日：	2016-01-27
發明（設計）人：	洪霞;杜霞	申請（專利權）人：	江蘇維賽科技生物發展有限公司
主分類號：	G01N33/577	分類號：	G01N33/577;G01N21/76
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摘要：
搜索關鍵詞：	檢測阿德呋啉化學發光免疫試劑盒
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種檢測阿德呋啉的化學發光免疫檢測試劑盒，用于檢測動物源性食品中如雞肉組織、內臟中的阿德呋啉含量或殘留量。屬于免疫學檢測領域。

背景技術

阿德呋琳屬核苷酸類化合物，英國科學家在上個世紀七十年代有相關研究報道，在我國是一種正在研發的新型高效抗球蟲藥物。阿德呋啉針對球蟲有良好的治療效果，其抗球蟲指數ACI為183.2。將一定量的阿德呋啉藥物飼養羅曼雄性雛雞，可明顯檢測到雞肝和雞腎中阿德呋啉以原藥形式存在。以昆明種健康小氣考察阿德呋啉的急性毒性試驗，口服給藥，給藥一次或24h內多次給藥后，一定時間內所產生的毒性反應及死亡過程得出阿德呋啉LD₅₀為3443.5mg?Kg^-1?bw^-1最高劑量給藥后，小鼠精神沉郁、呼吸急促。剖檢部分死亡小鼠發現腹腔液較多，藥物吸收不完全，脾臟腫大。目前在家禽等動物中都沒有阿德呋琳的相關研究報道，為了完成新獸藥申報，建立阿德呋啉藥物的安全評價，保障食品安全，所以開展阿德呋啉的檢測研究。

近年來，水、食品安全、衛生、公共健康和能源等與大眾的生活息息相關的問題，也越來越受到全球的關注，見附錄1。世界各國針對食品安全問都幵展研究解決辦法。歐盟從2006年1月1日起開始執行新的食品安全法規，其中特別要求進口食品必須符合新法規的標準，否則歐盟委員會有權取消其進口資格。隨著獸藥在畜禽詞養過程中的長期大量使用，防止濫用藥物具有重要意義。在西方經濟發達的國家，人們十分重視獸藥殘留的監控，頒布了一系列畜產品中獸藥殘留限量標準和管理法規，嚴格實施對畜產品中獸藥殘留的監督、監控與檢測，制定了詳盡的獸藥殘留檢測方法。

化學發光免疫檢測技術是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光檢測技術的高靈敏性和免疫分析技術的高特異性。本發明通過特有的免疫動物制備具有高親和力、高特異性的阿德呋啉抗體，并采用酶標記抗體，建立一種可以檢測阿德呋啉的化學發光免疫試劑盒，將為雞肉產品中阿德呋啉藥物留檢測提供新方法，對保證畜產品安全提供重要的理論和實踐依據，維護畜牧業健康發展具有重要意義。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明主要是利用抗原與抗體的特異性免疫反應的基本原理來實現的。化學發光免疫分析是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光法的高靈敏度和免疫分析法的高特異性。在整個反應過程中，樣品中阿德呋啉含量越高，反應體系中發光強度越弱；反之，樣品中阿德呋啉含量越少，發光強度越高。

本發明是一種檢測阿德呋啉的化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于含有以下成份：

1、包被有阿德呋啉-載體蛋白偶聯物的不透明白色酶標板；所述阿德呋啉-載體蛋白偶聯物是將阿德呋啉與載體蛋白通過混合酸酐法或碳二亞胺法偶聯得到，所述載體蛋白為人血清白蛋白、牛血清白蛋白、雞蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、阿德呋啉標準品；

3、阿德呋啉-過氧化物酶標記抗體：該成分為用過氧化物酶標記的阿德呋啉抗體，所述阿德呋啉抗體為單克隆抗體或多克隆抗體；

4、發光底物液：該發光底物液是以魯米諾貨異魯米諾為發光劑的化學發光底物液，分為A液和B液保存，在使用前按1:1混合使用；其中A液位發光增強劑加魯米諾貨發光增強劑加異魯米諾，B液為過氧化氫溶液或尿素過氧化氫溶液；

5、2倍濃縮稀釋液；

6、20倍濃縮洗滌液。

本發明中，所述的不透明白色酶標板為96孔的可拆卸或不可拆卸的不透明白色酶標板。

本發明中，所述的阿德呋啉標準品，由一系列不同濃度的阿德呋啉標準品組成，濃度為0.02~5.12ng/mL的濃度區間。

本發明中，所述的阿德呋啉-過氧化物酶標記抗體為用過氧化物酶標記的阿德呋啉抗體，如辣根過氧化物酶(HRP)標記的阿德呋啉抗體。

本發明中，所述的發光底物液為商品化的任一種以魯米諾貨異魯米諾為發光劑的化學發光底物液。

本發明中，所述所述2倍濃縮稀釋液，其成分為0.01mol/L，pH7.4的磷酸緩沖液、甘氨酸-HCl緩沖液或Tris-HCl緩沖液，使用前請按1：1稀釋（1份濃縮樣品稀釋液+1份去離子水）。