[發明專利]一種制作心肌梗死動物模型的方法

在審

• 申請號: 201410349211.6
• 申請日: 2014-07-22
• 公開（公告）號: CN104146996A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 郭卯戊;北島俊一;張海飛;左從林;孫云霞
• 申請（專利權）人: 昭衍(蘇州)新藥研究中心有限公司
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61K49/00
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 劉述生

技術領域

本發明涉及醫療技術領域，特別是涉及一種制作心肌梗死動物模型的方法。

背景技術

心血管疾病是目前導致全世界致死性疾病之一，其中心肌缺血梗塞占主導作用。對心肌梗塞的治療中，溶解血栓已經成為最重要的手段。評價溶栓藥物作用的動物模型可分體內體外血栓形成兩大類，前者是在血管內原位形成血栓，后者是先在體外制備同位素標記、非標記或染色學凝塊，注入一定部位血管造模。其中用于評價心肌梗塞溶栓藥物療效的動物模型有多種，如結扎冠狀動脈前降支、冠狀動脈注入血栓、腹腔注射異丙腎上腺素造成心肌缺血梗塞等。但在制備模型和溶栓評價等環節中存在著個體變異大、靈敏度較差等不足。更為重要的，小型豬等大型實驗動物因與人類冠脈結果高度相似，在心肌梗塞藥效學評價中具有重要作用，但常用的冠脈結扎等方法不適于對藥物溶栓作用的評價。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種制作心肌梗死動物模型的方法，在與人類冠脈高度相似的大型實驗動物上建立適用于溶栓藥物藥效學評價的模型，開發一種簡單易行、能廣泛推廣的、可真實模擬心肌梗死自然發生過程、過程可控、模型穩定的方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是：提供一種制作心肌梗死動物模型的方法，包括步驟為：（1）麻醉動物；（2）測心電圖；（3）開胸，暴露心臟；（4）注射Rose?Bengal；（5）激光照射，生成血栓；（6）縫合胸腔；（7）術后護理；步驟（4）和（5）中注射Rose?Bengal并同時以特定波長的綠色激光照射動物冠狀動脈，誘發血栓生成，造成局部心肌梗塞，出現心肌梗塞心電圖。

在本發明一個較佳實施例中，步驟（4）中所述Rose?Bengal的劑量為20?mg/kg。

在本發明一個較佳實施例中，步驟（5）中所述激光為波長是532?nm的綠色激光，所述動物心臟的冠脈血管是動物心臟的冠脈左旋支支脈。

在本發明一個較佳實施例中，所述動物為大型實驗動物，是食蟹猴、比格犬、小型豬中的一種。

本發明的有益效果是：本發明的制作心肌梗死動物模型的方法，該方法制作過程簡單，可廣泛推廣，實驗成果率高，結果穩定，光化學法應用于小型豬等大型實驗動物，因其冠脈特點與人高度相似，具備較高藥理學評價意義，實驗過程模擬血栓生成，在對溶栓藥物的評價中具有重要意義。

具體實施方式

下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發明的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發明保護的范圍。

以小型豬為例，提供一種制作心肌梗死動物模型的方法，包括步驟為：

（1）用50?mg/kg氯胺酮合并20?mg/kg戊巴比妥鈉誘導麻醉動物即小型豬。

（2）以MP150生理信號記錄系統測動物的心電圖并記錄。

（3）對動物進行口腔氣管插管，連接呼吸機，呼吸比為1:2，頻率為15次/分鐘，潮氣量為約12?ml/kg，以異氟烷維持麻醉。沿左側第4、5肋間開口，逐層分離皮下組織，開胸，并用開胸器固定，剪開心包膜，掀起左心耳，游離冠脈左旋支約0.5?cm左右，用1根3-0絲線穿過備用。

（4）靜脈注射20?mg/kg?Rose?Bengal，2分鐘內注射完畢；

（5）與靜脈注射同步，開始以532?nm綠色激光發生器（GL532Ta-100FC，上海光騰進出口有限公司）對所分離的冠脈血管持續照射。照射過程中嚴密監視動物ECG波形的變化，結合照射部位冠脈左旋支梗塞情況，確定照射時間；通過MP150密切觀察心電圖變化，以ST段明顯抬高作為心肌梗塞最重要判斷指標。

（6）造模完成，縫合心包膜、關胸、逐層縫合各組織，每層縫合前滴入抗生素藥液。縫合完畢，給動物穿上特制馬甲，遙測植入子主體固定于馬甲上。

（7）術后動物積極看護，必要時給予保暖措施，每0.5小時觀察，直至完全清醒。

本發明采用Rose?Bengal結合綠色激光照射的光化學法照射動物特定冠狀動脈造模，能真實模擬心肌梗塞過程，且在造模過程中針對不同動物個體情況，對照射強度、時間等進行實時微調，實時檢測冠脈血流情況及心電圖波形，模型成功率高，穩定性好。在照射后1周內，可觀察到心肌組織的破碎、核溶解等典型的凝固性壞死。