[發(fā)明專利]一種基于單顆粒Au@Ag核殼結(jié)構(gòu)的檢測刀豆蛋白的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410349017.8
• 申請日: 2014-07-21
• 公開（公告）號: CN104237174A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張磊;范曲立;王斌;盧曉梅;黃維
• 申請（專利權(quán)）人: 南京郵電大學
• 主分類號: G01N21/63
• 分類號: G01N21/63
• 代理公司: 江蘇愛信律師事務(wù)所 32241
• 代理人: 唐小紅

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及一種溶液中微量刀豆蛋白的檢測方法，屬于納米材料生物應(yīng)用領(lǐng)域。?

背景技術(shù)??????????????????????????????????

金和銀等貴金屬納米晶在入射光照射下，界面的導(dǎo)帶電子和光子發(fā)生共振形成等離子體共振激元，大量等離子體激元的共振形成共振電磁場的現(xiàn)象被稱為LSPR現(xiàn)象；當Au或Ag納米顆粒表面的環(huán)境介質(zhì)發(fā)生變化，會引起界面的折射率的變化，這種變化會改變Au或Ag納米顆粒對入射光共振頻率選擇；基于本身的這種特殊的LSPR光譜性質(zhì)，Au、Ag納米顆粒受到了相當多的關(guān)注，國內(nèi)外多個研究課題組已經(jīng)可以用多種方法制備出納米球，納米棒，納米圈，納米立方體等擁有不同SPR性質(zhì)的Au、Ag納米粒子，并將它們廣泛的應(yīng)用于和光電子、催化、信息存儲、化學生物傳感和表面增強拉曼散射等相關(guān)的化學、生物、物理、醫(yī)藥和治療學等多個領(lǐng)域內(nèi)。由于Au、Ag納米粒子自身良好的大比表面積、光譜性質(zhì)、良好的生物相容性和受介質(zhì)影響易發(fā)生改變的高靈敏性，已經(jīng)被用來作為發(fā)展超靈敏度傳感器和成像等方面的主要基礎(chǔ)材料。Au或Ag納米顆粒和生物分子的連接用于進行生物檢測更是近十年來研究的熱點；用MUA包覆的Au?Nanorods吸附了streptavidin生物素之后LSPR吸收峰的位置發(fā)生變化實現(xiàn)了對這種特異性吸附的識別；用表面包裹抗體的Au納米棒特異性連接抗原使Au納米棒?表面的折射率改變而引起LSPR吸收峰的移動，實現(xiàn)了對抗體-抗原體系的選擇性吸附的觀測；用S-mRNA包裹的Au?納米顆粒特異性連接DNA可以在DFM（暗場顯微鏡）下觀測到Au納米顆粒的LSPR的移動，實現(xiàn)對細胞內(nèi)遺傳信息表達的監(jiān)測；等等。Au、Ag納米顆粒應(yīng)用于SPR傳感器的優(yōu)勢已經(jīng)得到了廣泛的認可。

糖蛋白（glycoprotein）是由寡糖和多肽鏈共價修飾連接而形成的一類重要生理活性物質(zhì),它廣泛存在于細胞膜、細胞間質(zhì)、血漿以及粘液中。糖蛋白中的糖鏈在維持蛋白質(zhì)穩(wěn)定、抵抗蛋白酶水解、防止抗體識別及參與肽鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的折疊啟動等方面發(fā)揮著重要作用,具有開關(guān)和調(diào)諧功能、激素功能、胞內(nèi)轉(zhuǎn)運功能、保護和促進物質(zhì)吸收、參與血液凝固與細胞識別等,對于增殖的調(diào)控、受精、發(fā)生、分化以及免疫等生命現(xiàn)象,起著十分重要的作用。將Au、Ag納米顆粒應(yīng)用于生物體內(nèi)糖蛋白的檢測，對于研究人體的多種新陳代謝和生理機能的過程都有著十分積極的意義。?

由于具有免標記性質(zhì)和定量測定能力，基于貴金屬納米顆粒的表面等離子體共振傳感方法對于檢測蛋白質(zhì)樣品是很有效果的。大部分檢測方法都面臨著干擾精確度和測定過程中收集到的光學信號確定的定量結(jié)果這樣的挑戰(zhàn)。作為對比，表面等離子體共振傳感方法可以實現(xiàn)定量和更加經(jīng)得起檢驗來直接得到可以解釋的數(shù)據(jù)結(jié)果。表面等離子體共振傳感方法的測定過程的實現(xiàn)不需要依靠任何的標記，并且可以直接從貴金屬納米顆粒的表面等離子體共振光譜表征出來。再結(jié)合他們在小型化，可芯片化操作等優(yōu)勢，表面等離子體共振傳感方法方法可以成為熒光標記，放射性標記等觀測方法的更合適的替代品。?

發(fā)明內(nèi)容

將AuAg?核殼納米立方體修飾在ITO基底上，在其表面修飾上2,2′-二硫二乙醇甘露糖衍生物，此時AuAg?NC表面裸露的甘露糖端基可以用來和刀豆蛋白結(jié)合；AuAg-mannose就可以作為檢測溶液中微量刀豆蛋白的生物探針。?

本發(fā)明技術(shù)方案如下：

1、用種子生長法合成30nm的Au納米顆粒，采用如下方法制備得到：

步驟1.?種子合成

在反應(yīng)瓶中加入100?mM?CTAB（aq）和10?mM?HAuCl4（aq），在磁力攪拌器上中速攪拌使其混合均勻，將冰浴過的現(xiàn)配10?mM的NaBH4（aq）一次性迅速加入到CTAB和HAuCl4?的混合溶液中，溶液瞬間由黃色變成棕色；將得到的種子溶液在28℃水浴中保溫3?h。

步驟2.?大粒徑金球的合成?

在反應(yīng)瓶中加入200?mM?CTAC（aq）?和0.01?M?的HAuCl4（aq）混合之后用磁力攪拌使溶液均勻；?100?mM?的新配制的抗壞血酸溶液迅速加入到混合溶液，之后黃綠色的溶液瞬間變成無色透明溶液；攪拌均勻后一次性快速加入步驟1的棕色金種子溶液，整個溶液慢慢變?yōu)榱良t色透明膠體；在36?℃水浴中保溫1?h后大粒徑的金納米顆粒。

2.?合成生物相容性好、形貌可控的AuAg?核殼納米立方體，其采用如下方法制備得到：?