[發(fā)明專利]用于診斷手足口病極重癥的分子標(biāo)記物及其檢測方法與試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410348808.9
• 申請日: 2014-07-21
• 公開（公告）號: CN104073569A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧力;賈紅玲;肖傳樂;劉超武
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市婦女兒童醫(yī)療中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)和醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，特別是涉及一種用于診斷手足口病極重癥的分子標(biāo)記物及其檢測方法與試劑盒。

背景技術(shù)

手足口病(Hand,foot,and?mouth?disease，HFMD)是一種常見傳染病，以嬰幼兒發(fā)病為主。引起手足口病的病原主要為腸道病毒屬的柯薩奇病毒(Coxasckie?virus)A組16、4、5、7、9、10型，B組2、5、13型；?？刹《?ECHO?viruses)和腸道病毒71型(EV71)，其中以EV71及CAl6型最為常見，EV71感染引起重癥病例的比例較大。手足口病大多數(shù)患者癥狀輕微，表現(xiàn)為發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹。疾病進(jìn)程為自限性，一般預(yù)后良好，但少數(shù)極重癥患者可并發(fā)無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，個(gè)別極重癥患兒病情進(jìn)展快，易發(fā)生死亡；因此該疾病迫切需要尋找極重癥手足口病的特異的生物標(biāo)記分子，指導(dǎo)醫(yī)生診斷和臨床治療，從而使極重癥手足口病患者達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療的目標(biāo)，為臨床控制和預(yù)防極重癥手足口病的發(fā)生、發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

MicroRNA(miRNA)是一類生物體內(nèi)自然形成的小分子非編碼RNA，參與調(diào)節(jié)其特異靶基因的表達(dá)，從而達(dá)到調(diào)控蛋白的目的，具有調(diào)節(jié)發(fā)育時(shí)序，細(xì)胞增殖，分化，代謝，凋亡與應(yīng)激以及參與脊椎動(dòng)物心臟、肌肉以及神經(jīng)系統(tǒng)的形成，同時(shí)具有調(diào)控疾病發(fā)生、發(fā)展的功能。約50％的已知人類miRNA基因定位于和腫瘤及疾病相關(guān)的染色體區(qū)域，而不斷累積的研究成果也已充分證實(shí)miRNA的異常表達(dá)與疾病的發(fā)生，發(fā)展密切相關(guān)?；蛐酒夹g(shù)近些年來發(fā)展迅速，被廣泛的應(yīng)用于各個(gè)生命科學(xué)領(lǐng)域，包括疾病預(yù)測與診斷、基因突變檢測、遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷等臨床應(yīng)用中，目前microRNA芯片已經(jīng)成為篩選miRNA生物標(biāo)志物的重要手段之一。

生物標(biāo)記物是指能將機(jī)體的生理和疾病狀態(tài)區(qū)分開來的生物分子，篩選到可用于疾病早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷的生物標(biāo)志物可大大提高患者的臨床治療效果。最新數(shù)據(jù)顯示腫瘤組織普遍具有特征性的miRNA表達(dá)譜，即指腫瘤細(xì)胞中某些miRNA的表達(dá)水平異常，而這種異常的特征性miRNA可以成為用于腫瘤或疾病的診斷，病理分級，臨床分期，治療與預(yù)后的生物標(biāo)志物，顯示了較好的臨床應(yīng)用前景。

目前，由于手足口病對于嬰幼兒具有很強(qiáng)的傳染性，一般是通過臨床癥狀和病毒鑒定來診斷手足口病，但沒有明確的分子標(biāo)記物來區(qū)別手足口病輕癥和重癥，造成許多小孩預(yù)后不良的結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一提供一種具有特異性區(qū)分能力，穩(wěn)定性好，效率高及成本低的用于診斷手足口病極重癥的生物標(biāo)記物及其應(yīng)用。

實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下。

血清中exosome里的miR-671-5p作為快速診斷手足口病極重癥分子標(biāo)記物的應(yīng)用。

或者，血清中exosome里的miR-671-5p，以及選自miR-16-5p和miR-150-3p中的至少一種作為快速診斷手足口病極重癥分子標(biāo)記物的應(yīng)用。

快速診斷手足口病極重癥的分子標(biāo)記物，該分子標(biāo)記物包括有血清中exosome里的miR-671-5p。

進(jìn)一步地，還包括有miR-16-5p和/或miR-150-3p。

本發(fā)明的另一目的，在于提供一種快速診斷手足口病極重癥的試劑盒。

實(shí)現(xiàn)該目的的技術(shù)方案如下。

一種快速診斷手足口病極重癥的試劑盒，包括有檢測血清中exosome里的miR-671-5p的表達(dá)量的試劑。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，進(jìn)一步還包括有檢測血清中exosome里的miR-16-5p和/或miR-150-3p的表達(dá)量的試劑。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，進(jìn)一步還包括有檢測內(nèi)參miR-642a-3p的表達(dá)量的試劑。

更進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了一種快速診斷手足口病極重癥的熒光定量PCR試劑盒。

一種快速診斷手足口病極重癥的熒光定量PCR試劑盒，包括有

(A)針對血清中exosome里的miR-671-5p的反轉(zhuǎn)錄引物SEQ?ID?NO:5、以及熒光定量PCR檢測引物對SEQ?ID?NO:9和SEQ?ID?NO:10，以及檢測內(nèi)參miR-642a-3p的表達(dá)量的試劑。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括有