[發明專利]MicroRNA-433在制備治療高血壓腎衰竭藥物中的應用及其藥物

在審

• 申請號: 201410348629.5
• 申請日: 2014-07-21
• 公開（公告）號: CN104174030A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 鐘志剛
• 申請（專利權）人: 香港中文大學深圳研究院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K49/22;A61P13/12;A61P9/12
• 代理公司: 深圳新創友知識產權代理有限公司 44223
• 代理人: 王震宇

技術領域

本發明涉及MicroRNA-433在制備治療高血壓腎衰竭藥物中的應用及其藥物。

背景技術

高血壓腎病變已是末期腎病最重要的原因之一，而高血壓也是慢性腎衰竭最常見的并發癥。

在慢性高血壓腎臟病時，因為應腎絲球過濾率的下降，腎臟本身會造成第二型血管張力素(angiotensin?II，AngII)，而Ang?II會收縮出球小動脈造成腎絲球壓力上升來代償腎絲球過濾率的下降。同時，AngII通過活化TGF-beta/Smad信號引致腎臟纖維化，最后，腎臟纖維化導致終末期腎功能衰竭，由于TGF-beta/Smad信號調控在腎臟疾病中的細胞外基質的表達，所以針對TGF-beta信號是控制纖維化的一個有吸引力的治療方法。然而，在TGF-beta信號傳導途徑的復雜性使得選擇適當的治療靶點困難。尤其是，針對在TGF-beta信號傳導途徑中的單個元素的方法被證明效用不大。

在過去的十年中，許多策略以直接阻斷TGF-beta影響已經被開發，包括使用TGF-beta的中和抗體、抑制TGF-beta的寡脫氧核苷酸(ODN)、可溶性人類TGF-betaⅡ型受體，或TGF-beta受體激酶的特異性抑制劑。然而，通過深入調查后，發現采用這些策略作沒有產生如預期的有效的結果。這可能是由于封鎖TGF-beta信號上游傳導途徑會損害TGF-beta的有效的抗發炎特性，并隨后促進腎臟炎癥。另一方面，細胞內的Smad通路的串擾會阻礙靶向TGF-beta與TGF-beta受體激酶的策略。

發明內容

本發明的主要目的在于針對現有的治療高血壓腎衰竭藥物的不足，提供MicroRNA-433在制備治療高血壓腎衰竭藥物中的應用及其藥物。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種將抑制miR-433的物質用于制備治療高血壓腎衰竭藥物的應用，使用敲低miR-433質粒制作所述藥物。

優選地：

將所述敲低miR-433質粒與微泡造影劑混合以制作所述藥物。

所述微泡造影劑為六氟化硫微泡造影劑，優選造影劑(Bracco?imaging?B.V,Plan-Les-Quates?Geneve,Switzerland)。

所述敲低miR-433質粒與所述微泡造影劑的體積比為1:1。

構造敲低miR-433的質粒是將一個針對miR-433之初級轉錄物的短發夾RNA(shRNA)合成在載體中，以產生一個miR-433的小發夾RNA，其中所述短發夾RNA的序列為:GAG?AAG?GAT?CAT?GAT?GGG?CTT，優選地，所述載體為pSilencer4.1載體(Invitrogen，Carlsbad,VA,USA)

采用不含內毒素的質粒試劑盒產生敲低miR-433的質粒。

制作含1μM/ml的敲低miR-433的shRNA質粒的微泡的靜脈注射劑。

一種治療高血壓腎衰竭的藥物，含有敲低miR-433質粒。

還含有微泡造影劑，優選地，所述敲低miR-433質粒與所述微泡造影劑的體積比為1:1。

采用含1μM/ml的敲低miR-433的shRNA質粒的靜脈注射劑。

本發明的有益效果：

本發明提供抑制miR-433以治療高血壓腎衰竭的藥物及其制備方法。抑制miR-433的治療不單有效抑制AngII信號,也抑制從AngII信號活化的TGF-beta信號，壓制Smad3蛋白的磷酸化機制去調控Smad3的激活，而且減少體內腎纖維化和中止腎纖維化的進展。miR-433的抑制將會是打擊慢性高血壓腎臟病的一種有效的治療。

此外，MicroRNA的治療優點是，它們能針對參與同一信號途徑內多個基因。與此相反，傳統療法只針對單一蛋白，而使其他蛋白不會受到影響，因此未必能夠有效調控維持的病理機制。在另一方面中，miRNA具有特定的和定義的目標在該疾病的發病機制，從而導致治療的高特異性。其它的優點是長效作用和生物利用度，實際上的microRNA調節劑可以在體內大部分組織有效地作用。

本發明提供的藥物可用于實現新型、安全、有效、可控制的基因療法,來抑制從AngII信號活化的TGF-beta介導的腎臟纖維化。

附圖說明

圖1A示出未使用本發明實施例的藥物時和使用本發明實施例的藥物之后的實時PCR檢測結果；

圖1B示出未使用本發明實施例的藥物時和使用本發明實施例的藥物之后的免疫組織化學結果；