[發明專利]一種葉螨生物測定方法及其應用

在審

• 申請號: 201410347602.4
• 申請日: 2014-07-21
• 公開（公告）號: CN104062413A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 王少麗;王玲;張友軍;吳青君;謝文;徐寶云
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;G01N33/48
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

技術領域

本發明涉及一種葉螨生物測定方法，屬于植物蟲害防治領域。

背景技術

葉螨屬節肢動物門(Arthropoda)、蛛形綱(Arachnida)、蜱螨亞綱(Acari)、真螨目(Acariformes)、葉螨總科(Tetranychoidea)，葉螨屬(Tetranychus)。葉螨在田間發生種類繁多，如二斑葉螨Tetranychus urticae、朱砂葉螨T.cinnabarinus和截形葉螨T.truncatus等，葉螨分布廣泛、寄主植物種類多，是一種世界性的農業害螨。田間防治不及時，常可造成經濟損失15％-20％。

生產上對葉螨的防治主要以化學防治措施為主。防治葉螨的高效低毒藥劑的篩選基礎是基于葉螨生物測定的結果進行評價的。常用的葉螨生物測定方法是聯合國糧農組織所推薦使用的標準方法—玻片浸漬法(FAO，1980)，需要用零號毛筆將葉螨背部小心地粘貼在雙面膠帶上，再浸漬在不同濃度的藥液中(唐小鳳等，2014)，也是目前很多實驗室常用的葉螨生測方法。但該技術明顯的缺點是操作技術相對復雜，易對螨體造成損傷，操作者需要進行較長時間的技術練習才能操作成功；而且這種方法主要測試的觸殺和內吸性能，而藥劑的胃毒特性則不易測試。第二種方法是葉碟噴霧法，該方法是將健康活潑的雌成螨挑于干凈的寄主植物葉片做成的葉碟上，待葉螨種群穩定后，將其及葉碟一起置于Potter噴霧塔下進行噴霧處理，而后晾干飼養即可(Tsagkarakou et al.,2009)。該技術的優點是較為接近田間的實際農藥施用過程，操作簡單，對螨體損傷小，缺點是噴在葉碟上的藥液量多少對殺螨效果影響較大，另外儀器相對昂貴，且對于儀器的要求較為嚴格。葉片殘毒法也稱為藥膜法，是將寄主植物葉片先浸漬于藥液中，取出晾干后再將葉螨挑于葉片上，但是藥膜的薄厚對于實驗結果有一定的影響，而且由于害螨只是通過螨足接觸藥劑，不能確定具體的施藥量，對室內研究來說具有一定的局限性(陳麗麗等，2005)，而且葉螨也常出現逃逸，影響計數。近幾年國外學者推薦使用瓶膜法(Residual Coated Vial，簡稱RCV)(Kwon et al.,2010；Feng et al.,2011；Wang et al.,2014)，但是這種方法在使用過程中，需要從收集葉螨卵開始，采用3-5天內孵化的成螨進行測試(減少其吐絲結網的比例)，因此試蟲準備時間較長，同時由于藥劑的脅迫壓力，葉螨仍會出現應急反應而吐絲、纏繞等，造成的試驗誤差較大；另外，該方法僅能測試藥劑的觸殺活性，藥劑的胃毒、內吸活性則難以測定。

發明內容

針對上述生物測定方法中存在的問題和缺點，本發明提供一種新的葉螨生物測定方法，技術方案如下：

一種葉螨生物測定方法，包括如下步驟：

(1)配藥：將供試藥劑配制成設定濃度的藥液；

(2)浸管：將所述藥液轉入管狀容器中，使得管狀容器完全被藥液浸滿，不留空隙；

(3)晾管：浸管后倒掉管內藥液，將管狀容器倒置，室溫下晾干；

(4)葉片浸藥：將新鮮的寄主植物葉片制成大小均一的圓形葉片，放入所述藥液中浸泡，然后室溫晾干；

(5)裝管：將所述藥液浸過的葉片夾入浸管后的所述管狀容器中，所述葉片平整斜向且葉背向上放置，然后再放入受試葉螨，蓋上管狀容器的蓋子；

(6)培養箱飼養：將裝管后的所述管狀容器放置在溫度為26±1℃，光暗周期L:D＝16h:8h的昆蟲培養箱中飼養；

(7)結果檢查：檢查受試葉螨的死亡與成活情況，記錄其死亡數和成活數。

所述浸管的參數為：室溫下，浸泡2個小時。

所述葉片浸藥的時間為10秒鐘。

所述管狀容器為1.5～2ml的塑料離心管；所述葉片的直徑為1.5cm的圓形葉片。

每個所述離心管放入30頭雌成螨進行生物測定；放入葉螨的方法是將葉螨放入折疊成漏斗形狀的稱量紙中，葉螨通過漏斗底部小口進入離心管中。

上述任一方法在葉螨生物測定中的應用。

一種篩選有效防治葉螨的藥劑的方法，其特征在于：采用上述任一所述的方法；

所述設定濃度指設定為系列梯度濃度；

所述供試藥劑為一至多種；

對每種供試藥劑的每個設定濃度下的藥液進行步驟(1)～(7)的操作，根據步驟7的結果檢查篩選出對葉螨有毒殺活性的有效藥劑種類，進而明確葉螨對各藥劑的敏感度。