[發(fā)明專利]干細(xì)胞的產(chǎn)生和保持

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410347355.8
• 申請日: 2009-12-16
• 公開（公告）號: CN104130976A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李文林;周宏彥;丁生
• 申請（專利權(quán)）人: 斯克里普斯研究所
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0735;C12N5/071
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 張瑩

1.通過至少一次細(xì)胞分裂培養(yǎng)多能細(xì)胞的方法，所述方法包括：

在充足量的：

a.MEK抑制劑；

b.GSK3β抑制劑；和

c.充分的營養(yǎng)足夠的時間，

存在時培養(yǎng)多能動物細(xì)胞，以允許至少一次細(xì)胞分裂同時保持細(xì)胞的多能性，其中所述多能動物細(xì)胞不是人胚胎干細(xì)胞。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述GSK3β抑制劑是CHIR99021。

3.權(quán)利要求1的方法，其中所述MEK抑制劑是PD0325901。

4.權(quán)利要求1的方法，其中所述多能動物細(xì)胞進(jìn)一步在充足量的TGF-β抑制劑存在時培養(yǎng)。

5.權(quán)利要求4的方法，其中所述TGF-β抑制劑是ALK5抑制劑。

6.權(quán)利要求5的方法，其中所述ALK5抑制劑是A-83-01。

7.權(quán)利要求5的方法，其中所述ALK5抑制劑是SB431542。

8.權(quán)利要求1的方法，其中所述多能動物細(xì)胞進(jìn)一步在存在足量成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)受體抑制劑時培養(yǎng)。

9.權(quán)利要求8的方法，其中所述FGF受體抑制劑是PD173074。

10.權(quán)利要求1的方法，其還包括在充足量的bFGF存在時培養(yǎng)所述多能動物細(xì)胞。

11.權(quán)利要求1的方法，其中所述多能動物細(xì)胞通過至少5次細(xì)胞分裂進(jìn)行培養(yǎng)，同時保持細(xì)胞多能性。

12.權(quán)利要求1的方法，其還包括向所述多能動物細(xì)胞中引入異源核酸，并且培養(yǎng)所得到的細(xì)胞，以允許至少一次另外的細(xì)胞分裂，同時保持多能性。

13.權(quán)利要求12的方法，其中將異源核酸引入到所述多能動物細(xì)胞中，然后誘導(dǎo)多能性，再然后進(jìn)行培養(yǎng)步驟。

14.權(quán)利要求1的方法，其中所述多能動物細(xì)胞是大鼠細(xì)胞或人細(xì)胞。

15.權(quán)利要求1的方法，其中所述多能動物細(xì)胞是靈長類、羊、牛、貓、狗、或豬的細(xì)胞。

16.權(quán)利要求1的方法，其中所述多能動物細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。

17.權(quán)利要求1的方法，其中所述多能動物細(xì)胞是誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞。

18.多能哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)物，其包括充足量的：

a.MEK抑制劑；和

b.GSK3β抑制劑；

以允許至少一次細(xì)胞分裂，同時保持細(xì)胞多能性，其中所述多能動物細(xì)胞不是人胚胎干細(xì)胞。

19.權(quán)利要求18的培養(yǎng)物，其中所述GSK3β抑制劑是CHIR99021。

20.權(quán)利要求18的培養(yǎng)物，其中所述MEK抑制劑是PD0325901。

21.權(quán)利要求18的培養(yǎng)物，其還包括充足量的TGF-β抑制劑。

22.權(quán)利要求21的培養(yǎng)物，其中所述TGF-β抑制劑是ALK5抑制劑。

23.權(quán)利要求22的培養(yǎng)物，其中所述ALK5抑制劑是A-83-01。

24.權(quán)利要求22的培養(yǎng)物，其中所述ALK5抑制劑是SB431542。

25.權(quán)利要求18的培養(yǎng)物，其還包括足量成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)受體抑制劑。

26.權(quán)利要求25的培養(yǎng)物，其中所述FGF受體抑制劑是PD173074。

27.權(quán)利要求18的培養(yǎng)物，其還包括充足量的bFGF。

28.權(quán)利要求18的培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞是人細(xì)胞或大鼠細(xì)胞。

29.權(quán)利要求18的培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。

30.一種細(xì)胞培養(yǎng)基，其包括充足量的下述：

a.MEK抑制劑；和

b.GSK3β抑制劑；

從而在所述培養(yǎng)基中培養(yǎng)多能細(xì)胞時，允許至少一次細(xì)胞分裂，同時保持細(xì)胞多能性。

31.權(quán)利要求30的培養(yǎng)基，其中所述GSK3β抑制劑是CHIR99021。