[發明專利]乙型肝炎病毒表面抗原定量測定試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201410346543.9
• 申請日: 2014-07-21
• 公開（公告）號: CN104090106A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 趙海英;王成軍;許文姣;王曉偉;吳晗琪
• 申請（專利權）人: 威海威高生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 青島高曉專利事務所 37104
• 代理人: 宋文學

1.一種乙型肝炎病毒表面抗原定量測定試劑盒，包括

測HBsAg磁微粒：標記有HBsAb單克隆抗體的磁性微粒子；

測HBsAg示蹤結合物：標記有HBsAb多克隆抗體的異魯米諾；

校準品：一低含量表面抗原的溶液和一高含量表面抗原的溶液；

分析緩沖液：含牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液；

樣本稀釋液：含牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。

2.一種制備權利要求1所述乙型肝炎病毒表面抗原定量測定試劑盒的方法，其特征是具體步驟如下：

（1）制備測HBsAg磁微粒????將帶羧基磁微粒與EDC按質量比1∶2，磁微粒與HBsAb單克隆抗體的比例為每毫克磁微粒標記20μg的單抗，在22~26℃混勻的情況下進行標記，標記時間1小時，標記后采用甘氨酸封閉多余的位點，使之濃度達到25mM，反應30分鐘，洗滌三次，加入磁微粒保存液，所述磁微粒保存液為含1%牛血清白蛋白的0.01M?PBS緩沖系統，使之終濃度達到每20μL測HBsAg磁微粒中含有20μg的磁微粒標記單抗，2~8℃保存；

（2）制備測HBsAg示蹤結合物????HBsAb多克隆抗體與異魯米諾的標記，反應體系為：戊二醛使用濃度為1.0%-2.0%，HBsAb多克隆抗體與異魯米諾的質量比為2∶1，在22~26℃反應1.5小時，用pH7.2-7.4的0.01M?PBS進行透析，透析后加入等體積甘油-20℃存放；最終將異魯米諾標記多抗用示蹤結合物稀釋液，所述示蹤結合物稀釋液為含20%小牛血清的0.01M?PBS緩沖系統，按照1∶3000的稀釋比例稀釋成測HBsAg示蹤結合物；

（3）制備分析緩沖液????磷酸二氫鈉?0.39g/L、磷酸氫二鈉?2.68g/L、氯化鈉?8.50g/L、牛血清白蛋白10g/L、硫柳汞?1.0g/L，按上述配方配制稀釋液；

（4）制備樣本稀釋液???磷酸二氫鈉?0.39g/L、磷酸氫二鈉?2.68g/L、氯化鈉?8.50g/L、牛血清白蛋白10g/L、硫柳汞?1.0g/L，按上述配方配制稀釋液；

（5）校準品包括校準品1和校準品2，其中校準品1為低含量表面抗原的溶液，校準品2為高含量表面抗原的溶液。

3.根據權利要求2所述乙型肝炎病毒表面抗原定量測定試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟（2）中戊二醛使用濃度為1.25%。