[發明專利]一種光甘草定含量的測定方法

無效

• 申請號: 201410346494.9
• 申請日: 2014-07-21
• 公開（公告）號: CN104076110A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 易銘;鐘慧;楊永安;湯文建
• 申請（專利權）人: 江蘇天晟藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林;郭曉敏

技術領域

本發明涉及一種光甘草定含量的測定方法，屬于含量檢測方法技術領域。

背景技術

甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch．、脹果甘草G.inflataBat.或光果甘草G.glabraL．的干燥根及根莖，具有補脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調和諸藥的功能。光果甘草中還含有特有的黃酮類成分光甘草定，它具有較強的抗炎，抗氧化和抗菌作用，應用前景廣闊。

光甘草定能深入皮膚內部并保持高活性，美白并高效抗氧化。有效抑制黑色素生成過程中多種酶的活性，特別是抑制酪胺酸酵素活性。同時還具有防止皮膚粗糙和抗炎、抗菌的功效。光甘草定是目前療效好、功能全面的美白成分。光甘草經過多年來的使用，作用明顯，安全性好。是目前國際上高檔美白化妝品的主要功效成分。

在專利號為201110230297.7的專利《香草醛-硫酸比色法測定光甘草定含量的方法》一文中采用香草醛-硫酸顯色后，利用比色法來測定光甘草定的含量，但是香草醛-硫酸是一種通用顯色劑，針對光甘草定不具有專一性，可見用來測定待測物種一類化合物的含量，比如說甘草中總黃酮的含量，其包括但不僅僅是光甘草定的含量。

而在《高效液相色譜法測定光果甘草中光甘草定的含量》等相關文獻報導中，采用等度洗脫的方式，但光甘草定分離度不佳。

發明內容

為了克服現有技術問題，本發明的目的在于提供一種簡便、快捷、重復性好的光甘草定含量的測定方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

一種光甘草定含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）設定高效液相色譜條件：溫度為室溫，相對濕度為25~40%，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以濃度為1%冰醋酸溶液為流動相B，洗脫方式為梯度洗脫，流速為0.8~1.2ml/min，柱溫為25~40℃，檢測波長為278~282nm；

（2）制備對照品溶液：將光甘草定對照品用有機溶劑溶解，形成對照品溶液，且所述的對照品溶液中，光甘草定對照品的濃度為0.1~0.5mg/ml；

（3）制備供試品溶液：將光甘草定粗提物用有機溶劑利用超聲溶解5~20min，然后，冷卻至室溫，得到供試品溶液，且所述的供試品溶液中光甘草定粗提物的濃度為0.2~2mg/ml；

（4）含量測定：分別取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，進行高效液相色譜儀的操作，并記錄色譜圖，然后，利用色譜圖計算光甘草定粗提物中光甘草定的含量。

進一步，步驟（1）中，所述的室溫的溫度優選為20℃，相對濕度優選為35%，洗脫時的流速優選為1ml/min，柱溫優選為30℃，檢測波長優選為280nm。

此外，步驟（1）中，所述的梯度洗脫中流動相A和流動相B在不同的時間段的濃度關系如下表所示：

優選，步驟（1）中，所述的梯度洗脫中流動相A和流動相B在不同的時間段的濃度關系如下表所示：

而步驟（2）和步驟（3）中所述的有機溶劑為濃度為30-60%的甲醇。優選濃度為40%的甲醇。

步驟（2）中，所述的對照品溶液中，光甘草定對照品的濃度優選為0.2mg/ml。

步驟（3）中，所述的供試品溶液中光甘草定粗提物的濃度優選為1mg/ml。而超聲溶解的時間則優選為15min。

本發明的有益效果為：本發明所述的方法具有專一性，能夠準確的測定光甘草定的含量，而采用梯度洗脫進行分析，具有很好的分離效果，能夠有效縮短分析時間，因此，具有所測成分分離度、線性關系、重現性、精密度、穩定性、回收率均較好的優勢，能夠準確，簡便，快捷的得到光甘草定的含量。

具體實施方式

下面結合具體實施例詳細說明本發明。

在本發明所述的實施例中，檢測儀器為島津高效液相色譜儀，包括LC?10ATvp?plus二元泵、SPD?10Avp?plus紫外檢測器和LC-solution色譜工作站。乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。光甘草定粗提物由江蘇天晟藥業有限公司提供，光甘草定對照品由江蘇天晟藥業有限公司研發中心提供，且經¹H,¹³C鑒定，HPLC歸一化純度98%以上。

實施例1：

1、設定高效液相色譜條件：