[發(fā)明專利]抗菌肽AWRK6在制備治療敗血癥藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410345566.8
• 申請(qǐng)日: 2014-07-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104147589A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王秋雨;王歡;金莉莉;王錚
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K38/10
• 分類號(hào): A61K38/10;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽(yáng)杰克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于小肽藥物應(yīng)用領(lǐng)域，具體地涉及一種抗菌肽AWRK6在制備治療敗血性休克藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

抗生素,被廣泛用于治療由細(xì)菌引起的感染，現(xiàn)今已經(jīng)產(chǎn)生了很多副作用，如導(dǎo)致了多重耐藥菌的出現(xiàn)，更嚴(yán)重的是，抗生素抑殺細(xì)菌使細(xì)菌死亡的同時(shí)釋放出大量?jī)?nèi)毒素(LPS)，釋放的內(nèi)毒素可引起多種慢性呼吸道疾病，包括慢性阻塞性肺疾病，哮喘，過(guò)敏性肺泡炎，也可產(chǎn)生內(nèi)毒素休克，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致死亡，僅在美國(guó)每年就有接近20萬(wàn)人死于敗血癥，由革蘭氏陰性菌感染所引發(fā)的敗血癥目前已成為世界醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一大難題。

內(nèi)毒素多由細(xì)菌分裂、死亡或是抗生素治療感染時(shí)釋放出來(lái)，可作用于多種宿主細(xì)胞如嗜中性類細(xì)胞、肥大細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，是敗血癥的主要致病因子。具體的作用機(jī)制為內(nèi)毒素與宿主血清蛋白(LPS結(jié)合蛋白)相互作用后激活單核細(xì)胞表面的LPS受體CD14，LPS-LBP-CD14復(fù)合物通過(guò)與TLR4相互作用后開(kāi)啟細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)通路,激活一系列轉(zhuǎn)錄因子,包括ERK-1、C-Jun、NF-кB、CREB，誘導(dǎo)早期促炎因子(如TNF–α、IL-8、IL-1β和NO)釋放，進(jìn)而釋放第二波促炎因子，如血小板激活因子、白三烯，這些炎癥因子的過(guò)量表達(dá)會(huì)引起組織損傷、凝血障礙、多器官功能障礙綜合癥(MODS)等，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致敗血癥或急性呼吸窘迫綜合征，甚至危及病人的生命。因此，尋求新興的能夠阻斷LPS對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)刺激的治劑已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界必要而迫切的任務(wù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療由內(nèi)毒素引起的敗血性休克的新生代抗感染治劑。

AWRK6(SWVGKHGKKFGLKKHKKH)為東北林蛙抗菌肽，由18個(gè)氨基酸構(gòu)成，分子量為2130.5，利用HNN法預(yù)測(cè)其為二級(jí)結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)主要為α-螺旋，等電點(diǎn)為9.60，不穩(wěn)定系數(shù)為-6.74，是具有較好生物穩(wěn)定性的陽(yáng)離子抗菌肽。

本發(fā)明提供的抗菌肽AWRK6可按本領(lǐng)域多肽的常規(guī)固相技術(shù)合成，小肽序列為SWVGKHGKKFGLKKHKKH，并采用高效液相色譜和質(zhì)譜技術(shù)，鑒定小肽序列和純度(大于98％)，冷凍干燥得到白色粉末狀抗菌肽AWRK6。)

本發(fā)明，通過(guò)一系列的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)對(duì)AWRK6抗內(nèi)毒素活性進(jìn)行評(píng)估，并進(jìn)一步對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為其開(kāi)發(fā)為新一代治療由內(nèi)毒素引起的敗血性休克的新生代抗感染治劑提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

AWRK6具備良好的中和LPS的結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果表明，AWRK6在體內(nèi)外均表現(xiàn)出了良好的中和內(nèi)毒素活性，并能以劑量依賴的方式顯著抑制由內(nèi)毒素所誘導(dǎo)的炎癥因子TNF-α和IL-8的釋放。此外，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，AWRK6能有效地保護(hù)肝臟免遭致死量LPS的攻擊，能顯著提高內(nèi)毒素血癥動(dòng)物的生存率，起到很好的治療效果，AWRK6對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞無(wú)毒，高劑量的AWRK6對(duì)小鼠也未表現(xiàn)出任何毒副作用。

通過(guò)本發(fā)明，表明了抗菌肽AWRK6可在制備治療敗血性休克藥物中的應(yīng)用。特別是用于制備治療由內(nèi)毒素引起的敗血性休克藥物中的應(yīng)用。抗菌肽AWRK6的有效劑量為2-10mg/kg/天。

附圖說(shuō)明

圖1：AWRK6體外中和內(nèi)毒素活性；

圖中，**表示與只加LPS組相比表現(xiàn)出極顯著差異(p<0.01)，PMB：多粘菌素B。

圖2：AWRK6抑制LPS所誘導(dǎo)的全血中IL-8的釋放；

圖中，*表示與只加LPS組相比差異顯著(p<0.05)，**表示與只加LPS組相比差異極顯著(p<0.01)，PMB：多粘菌素B。

圖3：AWRK6抑制LPS所誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α的釋放；

圖中，**表示與只加LPS組相比差異極顯著(p<0.01)，PMB：多粘菌素B。

圖4：AWRK6對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞毒性分析。

圖5：不同濃度AWRK6治療后內(nèi)毒素血癥小鼠生存曲線圖

圖中，*表示與內(nèi)毒素血癥組相比生存差異顯著(p<0.05)，**表示與內(nèi)毒素血癥組相比生存差異極顯著(p<0.01)，cum?survival(1.0)表示存活率為100％。

圖6：AWRK6和PMB治療組小鼠生存曲線圖；

圖中，*表示與內(nèi)毒素血癥組相比生存差異顯著(p<0.05)，**表示與內(nèi)毒素血癥組相比生存差異極顯著(p<0.01)。

圖7：AWRK6治療內(nèi)毒素血癥小鼠時(shí)間依賴性結(jié)果。

圖8：AWRK6中和內(nèi)毒素血癥小鼠血清中內(nèi)毒素的結(jié)果圖；