[發(fā)明專利]一種受轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后雙調(diào)控的溶瘤腺病毒及其構建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410345521.0
• 申請日: 2014-07-18
• 公開（公告）號: CN104178460B
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設計）人: 王慧萍;韋芳;王榮花
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫(yī)院
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/861;A61K48/00;A61P35/00;C12R1/93
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發(fā)明屬生物醫(yī)學領域，涉及溶瘤腺病毒，具體涉及一種受組織或細胞特異性啟動子(轉(zhuǎn)錄水平)和microRNA(轉(zhuǎn)錄后水平)雙調(diào)控的新型溶瘤腺病毒及其構建方法，構建的雙調(diào)控溶瘤腺病毒比僅受組織或細胞特異性啟動子調(diào)控的溶瘤腺病毒更加安全、有效；本發(fā)明構建的雙調(diào)控溶瘤腺病毒能單獨使用或與現(xiàn)有的腫瘤治療方法結合使用，能顯著提高腫瘤治療效果并減少副作用。

技術領域

本發(fā)明屬生物醫(yī)學領域，涉及溶瘤腺病毒，具體涉及一種受組織或細胞特異性啟動子(轉(zhuǎn)錄水平)和microRNA(轉(zhuǎn)錄后水平)雙調(diào)控的新型溶瘤腺病毒及其構建方法，按此方法構建的雙調(diào)控溶瘤腺病毒比僅受組織或細胞特異性啟動子調(diào)控的溶瘤腺病毒更加安全、有效。

背景技術

據(jù)報道，生物治療是繼手術、放療、化療三大傳統(tǒng)療法之后治療癌癥的第四種療法，其主要包括免疫治療、細胞治療與基因治療等。有關腫瘤生物治療的研究與應用已經(jīng)取得較多成果，其中，條件復制型腺病毒可以在腫瘤細胞內(nèi)選擇性的復制，而且具有顯著的“溶瘤效應”和“旁觀者效應”，因而作為一種新興方式被期望在晚期癌癥的治療中發(fā)揮作用。目前最常用的構建條件復制型腺病毒的手段是利用人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)啟動子調(diào)控腺病毒早期復制必需基因(E1A)，實現(xiàn)其僅在腫瘤細胞內(nèi)特異性復制和溶瘤的作用，以保證其治療效應的安全性及有效性。然而，必須清楚地認識到，所述的安全性是相對的，尤其在高濃度病毒劑量的使用下，仍會產(chǎn)生比較嚴重的毒副作用，Kumiko Sugio等用人端粒酶啟動子調(diào)控E1A早期復制的腺病毒TRAD以10moi和2moi劑量分別感染人肺成纖維細胞WI38,結果發(fā)現(xiàn)，在2moi小劑量情況下，病毒復制量很少，而在10moi劑量下，病毒復制量有500倍的增加；John Nemunaitis得出同樣的結果；究其原因，均為腺病毒E1A基因的表達不夠嚴謹所導致。研究者認為，如果能夠在E1A mRNA的翻譯水平可根據(jù)細胞不同活性進行更精細地調(diào)控，使其E1A基因表達經(jīng)轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后水平雙重調(diào)控，則構建的這種新型條件復制型腺病毒，其嚴謹性必應得以增強，更為安全。近年來，MicroRNA是一類研究透徹的轉(zhuǎn)錄后基因表達調(diào)控分子，在腫瘤細胞和正常細胞中存在差異表達，它們是內(nèi)源表達的小編碼RNAs,通常只有18-25個核苷酸長度，是轉(zhuǎn)錄后基因表達的重要調(diào)控子,通過形成RNA誘導沉默復合體(RISC,RNA-induced silencing complex),和目的mRNA部分堿基完全互補配對結合，沉默靶基因；miR-145是其中研究眾多、也最為清楚的microRNA，在很多腫瘤中包括結腸癌、肺癌、胃癌、卵巢癌組織和細胞系中表達量是低的，而在它們的正常細胞中表達量較高。本申請的前期研究曾成功構建了一個人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)啟動子調(diào)控腺病毒復制早期必需基因E1A的腺病毒Adzq11，其能很好地在腫瘤細胞內(nèi)選擇性復制。

在此基礎上，本申請的發(fā)明人擬構建一種新的病毒Adzq11-145T。

與本發(fā)明相關的現(xiàn)有技術有如下參考文獻：

1.Wei Fang,Wang Hui-ping,Chen Xia-fang,et al.Construction andcharacterization of oncolytic adenovirus controlled under heat shock protein70 gene promoter[J].Prog.biochem.biophys,2009,36(12):1536-1543

2.Sugio K,Sakurai F,Katayama K,et al.Enhanced safety profiles of thetelomerase-specific replication-competent adenovirus by incorporation ofnormal cell-specific microRNA-targeted sequences[J].Clin Cancer Res,2011,17(9):2807-2818