[發(fā)明專利]一種尿同型胱氨酸快速測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410345429.4
• 申請(qǐng)日: 2014-07-19
• 公開（公告）號(hào): CN104237218A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫鑫;崔子倫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島貝爾奧生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 張世靜

?

技術(shù)領(lǐng)域

?本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，具體涉及一種快速檢測(cè)尿同型胱氨酸的方法。

背景技術(shù)

總同型胱氨酸（Total?Homocystine,?tHcy）包括同型胱氨酸和血漿中的雙硫衍生物。tHcy的正常水平是<15μmol/l。同型半胱氨酸是蛋氨酸降解的中間代謝物，正常情況下它可以再甲基再生成蛋氨酸。正常人的血和尿液中一般檢測(cè)不到同型半胱氨酸。如果胱硫醚合成酶（Cystationine?β-synthase,?CBS）或/和5-10-甲烯四氫葉酸還原酶（5,10-methylene-tetrahydrofolate?reductase,?MTHFR）缺乏，就會(huì)引起同型半胱氨酸及其硫醚衍生物在體內(nèi)聚集。測(cè)定尿同型胱氨酸就可以了解體內(nèi)同型胱氨酸的存在水平。

尿同型胱氨酸測(cè)定目前使用的方法是硝普鈉試驗(yàn)：尿液1ml加入5%氰化鈉水溶液，放置5分鐘，加入5%硝普鈉水溶液一滴，出現(xiàn)紅色或紫紅色為陽(yáng)性，表示尿中有過(guò)量的含硫氨基酸。該法涉及劇毒物質(zhì)---氰化鈉，生物安全度極低，給生產(chǎn)和使用均造成極大隱患。因此，發(fā)明一種安全無(wú)毒、操作簡(jiǎn)單、成本低廉的檢測(cè)方法及檢測(cè)裝置快速的確定尿液中是否含有同型胱氨酸，成為一個(gè)亟需解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)尿液中的同型胱氨酸方法毒性高、生物安全度低的問(wèn)題，本發(fā)明提供了新的尿同型胱氨酸快速測(cè)定方法，本發(fā)明提供的方法其生物安全度高，而且靈敏度高，成本低廉，方便快捷。

本發(fā)明提供的快速檢測(cè)尿液中同型胱氨酸的方法，包括以下檢測(cè)步驟：

在測(cè)試孔內(nèi)順序加入試劑A100μl、尿液50μl、試劑B50μl?和試劑C50μl，在對(duì)照孔內(nèi)順序加入試劑A100μl、尿液50μl、試劑D50μl、試劑B50μl?和試劑C?50μl；??2分鐘內(nèi)觀察兩孔顏色變化，若測(cè)試孔顯藍(lán)色、對(duì)照孔未顯色或測(cè)試孔顯色明顯重于對(duì)照孔則為陽(yáng)性，表明尿標(biāo)本內(nèi)含有同型胱氨酸；若兩孔均未顯色或顯色無(wú)明顯差異則為陰性，表明尿標(biāo)本內(nèi)不含有同型胱氨酸；

所述試劑A為2M?PH5.0的醋酸緩沖液，配制方法如下：

2M醋酸鈉溶液：醋酸鈉8.2g，加凈化水溶解，定容至100ml，

2M醋酸溶液：冰醋酸6g，加凈化水溶解，定容至100ml，

2M醋酸鈉溶液10ml加2M醋酸溶液2ml，混勻，冰箱冷存48小時(shí)；

所述試劑B為1%鐵氰化鉀溶液，配制方法如下：鐵氰化鉀1g,?加凈化水

溶解，定容至100ml；

????所述試劑C為2%三氯化鐵溶液，配制方法如下：三氯化鐵（含6分子

H2O）2g,?加凈化水溶解，定容至100ml；??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????

所述試劑D為0.1M二氯化汞溶液，配制方法如下：二氯化汞2.7g，加凈化水溶解，定容至100ml。

同型胱氨酸是含巰基（--SH）的氨基酸。同型胱氨酸中所含的巰基作為一種還原劑，可以使鉄氰化鉀還原成亞鉄氰化鉀，后者與三氯化鐵反應(yīng)生成普魯士藍(lán)而呈現(xiàn)藍(lán)色；

3K4Fe(CN)6?+?4FeCl3?→?Fe4[Fe(CN)6]3?+?12KCl

利用上述化學(xué)反應(yīng)可以測(cè)定尿中巰基含量，并以此作為定論性定性指標(biāo)，用于同型胱氨酸的檢測(cè)。

但是，尿中存在的尿酸作為還原性物質(zhì)也能使鉄氰化鉀還原，故有干擾。研究發(fā)現(xiàn)：巰基在酸性環(huán)境中還原性較強(qiáng)，而尿酸在堿性環(huán)境中具有還原性。制作一個(gè)酸性環(huán)境則可基本排除尿酸對(duì)巰基檢測(cè)的干擾。此外，二氯化汞可以與巰基特異性結(jié)合而使其失去還原功能，故以加用二氯化汞作為空白對(duì)照，可以排除尿酸等干擾物。

本發(fā)明提供的檢測(cè)方法，簡(jiǎn)單實(shí)用，成本低廉，安全可靠，可快速的篩查出尿液中不含同型胱氨酸的樣本、含同型胱氨酸的樣本和可能含有同型胱氨酸的樣本，為進(jìn)一步檢查做準(zhǔn)備。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。

實(shí)施例1

（1）請(qǐng)受檢者留取尿液2ml以上；

（2）向測(cè)試孔和對(duì)照孔內(nèi)分別滴入試劑A各100μL；

（3）再向測(cè)試孔和對(duì)照孔內(nèi)分別滴入標(biāo)本尿液各50μL,；

（4）再向?qū)φ湛變?nèi)滴入試劑D50μL；

（5）再向測(cè)試孔和對(duì)照孔內(nèi)分別滴入試劑B各50μL；

（6）再向測(cè)試孔和對(duì)照孔內(nèi)分別滴入試劑C各50μL；