[發明專利]VcLp15變體在基于TpN17的檢測抗密螺旋體抗體的免疫測定中作為抗干擾添加劑

有效

• 申請號: 201410344742.6
• 申請日: 2014-07-18
• 公開（公告）號: CN104297477B
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: E·法特茲;P·沙爾施密特;U·施密特;C·舒爾茨
• 申請（專利權）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號: G01N33/571
• 分類號: G01N33/571;G01N33/536;C07K19/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

本發明涉及用于檢測分離的樣品中的抗蒼白密螺旋體的TpN17抗原的抗體的方法，其中用霍亂弧菌脂蛋白15(VcLp15)的肽序列或其部分序列作為用于減少干擾(即用于最少化假陽性結果)的試劑。此外，本發明涉及包含VcLp15肽序列和分子伴侶的融合多肽，它們在免疫測定中作為用于減少干擾和用于最少化假陽性結果的添加劑的用途，及包含TpN17抗原和該VcLp15分子伴侶融合多肽的用于檢測分離的樣品中的抗蒼白密螺旋體抗原的抗體的試劑盒。

技術領域

本發明涉及用于檢測分離的樣品中的抗蒼白密螺旋體(Treponema pallidum)的TpN17抗原的抗體的方法，其中用霍亂弧菌(Vibrio cholerae)脂蛋白15(VcLp15)的肽序列作為用于減少干擾和用于最少化假陽性結果的試劑。此外，本發明涉及包含VcLp15肽序列和分子伴侶的融合多肽，它們在免疫測定中作為用于減少干擾和用于最少化假陽性結果的添加劑的用途，及包含TpN17抗原和該VcLp15分子伴侶融合多肽的用于檢測分離的樣品中的抗蒼白密螺旋體抗原的抗體的試劑盒。

背景技術

梅毒(Syphilis，又名Lues)是由隸屬于螺旋體細菌家族的蒼白密螺旋體引起的嚴重感染性疾病。它主要通過性接觸傳播，但也可以在妊娠期間從孕婦傳至胎兒。該疾病表征為不同的臨床階段和長的潛伏、無癥狀感染期。許多感染個體未注意到癥狀，因此多年未意識到其梅毒感染。初次感染有限，且通常引起小的無痛潰瘍(第一階段，“梅毒I(Lues I)”)。如果不進行青霉素治療，則該疾病進展至第二階段梅毒II(Lues II)(感染后約8周)，其產生流感樣癥狀、非發癢性皮疹和腫脹淋巴結。幾年后，在梅毒III(Lues III)階段，全身出現梅毒結節(syphilitic node)。最后的階段(梅毒IV(Lues IV))表征為中樞神經系統的破壞，最終導致神經和心臟障礙、全身麻痹(general paralysis)、共濟失調、癡呆和失明。

雖然由于在20世紀中葉引入了青霉素而有有效的療法可用，但梅毒仍是重要的全球性健康問題，估計全世界每年有一千二百萬例新的感染。必須可靠地鑒別密螺旋體感染患者，以起始抗生素療法，從而預防梅毒的進一步傳播。因此，有必要提供可靠的診斷工具(如免疫測定)來檢測抗蒼白密螺旋體的抗體。但是，為了在血清學應用中用作特異性化合物，重組衍生的蛋白質必須滿足幾點要求，如溶解性、穩定性和抗原性。

TpN17(蒼白密螺旋體菌株Nichols，17KDa)(其成熟形式是由134個氨基酸殘基組成的小蛋白質)是蒼白密螺旋體(梅毒的病原體)的免疫顯性抗原(J.Clin.Lab.Immunol.(1998),50,27-44；Folia Microbial.(2003)48(4),549-553)?？筎pN17的抗體在密螺旋體感染的個體中常見且豐富，有必要在旨在敏感和可靠地檢測密螺旋體感染的免疫測定中使用TpN17。

但是，我們觀察到，用TpN17作為抗原的免疫測定傾向于顯示假陽性結果，即它提供表面看來為陽性的信號，但實際上樣品中不存在抗密螺旋體的抗體。這些干擾是罕見但顯著的現象。它們損害了免疫測定的特異性，且它們顯然是由梅毒免疫測定中實際上不可或缺的蒼白密螺旋體抗原TpN17的使用引起。

因此，本發明潛在的問題可以視為提供用于檢測抗密螺旋體抗體時避免假陽性結果和提高基于TpN17的免疫測定的特異性的工具和方法。

發明概述

通過權利要求所表征的本發明來解決該問題。具體而言，本發明涉及用于檢測分離的樣品中抗蒼白密螺旋體的TpN17抗原的抗體的方法，其中用霍亂弧菌脂蛋白15(VcLp15)的肽序列或其部分序列作為用于減少干擾，即用于最少化假陽性結果的試劑。該VcLp15多肽序列的部分序列可以包含SEQ ID NO.1的氨基酸26-163。在另一實施方案中，該VcLp15肽序列或其部分序列與分子伴侶融合。