[發明專利]褐飛虱Nlcdc2基因及其編碼產物與應用

有效

• 申請號: 201410342832.1
• 申請日: 2014-07-18
• 公開（公告）號: CN104232651B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 俞曉平;郝培應;馬艷;申屠旭萍;陸潮峰
• 申請（專利權）人: 中國計量學院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/435;A01N57/16;A01P7/04
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙)33213
• 代理人: 吳秉中

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及褐飛虱細胞分裂周期基因Nlcdc2及其編碼產物與應用。

背景技術

褐飛虱（Nilaparvata lugens St?l）是一種繁殖力強且為害嚴重的水稻害蟲，主要以刺吸韌皮部汁液和傳播水稻病毒的方式為害水稻植株。近年來，褐飛虱頻頻爆發成災，已發展成為亞洲稻區的重要害蟲。目前，褐飛虱的防治主要依賴于噴施化學農藥和推廣水稻抗性品種等措施。但實踐表明，褐飛虱會對農藥產生很強的抗藥性，致使化學防治變得防不勝防；與此類似，褐飛虱在與水稻抗蟲品種相互作用的過程中，可以逐漸發展為能夠適應水稻品種抗性的新種群，致使推廣的抗蟲品種逐漸喪失其原有的抗性。褐飛虱防治工作因缺乏理想的靶標信息而難以采取針對性的策略。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明的目的在于設計提供褐飛虱Nlcdc2基因及其編碼產物與應用的技術方案。

所述的褐飛虱Nlcdc2基因，其特征在于含有SEQ ID No.1 所示的核苷酸序列。

所述的褐飛虱Nlcdc2基因的編碼蛋白，其特征在于含有SEQ ID No.2 所示的氨基酸序列。

所述的褐飛虱Nlcdc2基因在控制褐飛虱存活率中的應用。

所述的褐飛虱Nlcdc2基因在控制褐飛虱繁殖力中的應用。

本發明主要針對與褐飛虱生殖相關的細胞分裂周期基因Nlcdc2進行研究，探明了該基因在褐飛虱生殖發育中的表達規律和相關功能，明確了其作為害蟲防治新靶標的潛力，為發展基于Nlcdc2的害蟲防治新策略奠定了基礎。

附圖說明

圖1為褐飛虱Nlcdc2 RACE產物及核心序列的PCR擴增電泳圖；

圖1中： M: DNA分子量標準 DL2000 marker；1: 3'RACE產物-250bp左右；2: 5'RACE產物-750bp左右；3、4：已知核心片段序列-500bp左右；

圖2為褐飛虱Nlcdc2 全長cDNA序列及氨基酸序列分析圖；

圖3為褐飛虱P34cdc2及其他昆蟲的CDK1的系統進化樹；

圖4為褐飛虱Nlcdc2和β-actin的擴增標準曲線；

圖5為褐飛虱Nlcdc2和β-actin的熔解曲線；

圖6為褐飛虱不同發育時期Nlcdc2的表達量變化圖；

圖6中：N1: 1齡若蟲；N2: 2齡若蟲；N3: 3齡若蟲；N4: 4齡若蟲；N5: 5齡若蟲；F1: 羽化第1 d；F3: 羽化第3d； F5: 羽化第5 d；F7: 羽化第7 d；

圖7為dsRNA干擾片段電泳圖；

圖7中： M: DNA分子量標準 DL2000 marker；1: 合成的dsNlcdc2（500 bp） 2: 合成的dsGFP（350 bp）；

圖8為 Nlcdc2干擾后存活率的變化圖；

圖9為褐飛虱取食dsRNA后Nlcdc2表達量變化圖；

圖9中： 1: 飼喂后1 d；2: 飼喂后2 d； 4: 飼喂后4 d；6: 飼喂后6 d； 圖中數值為平均值±標準誤（N=3，n=10）；“*” 表示統計分析表明飼喂dsGFP與飼喂dsNlcdc2 0.1存在顯著差異(T檢驗，P<0.05)； “**” 表示統計分析表明飼喂dsGFP與飼喂dsNlcdc2 0.5存在極顯著差異（T檢驗，P<0.01）；

圖10為 Nlcdc2干擾后褐飛虱卵巢發育圖；

圖10中：A圖為對照組（喂食dsGFP）褐飛虱解剖后卵巢；B圖為實驗組（喂食dsNlcdc2）褐飛虱解剖后卵巢；

圖11為 褐飛虱RNAi后代個體數量圖。

具體實施方式

以下結合實施例來進一步說明本發明。

實施例1：褐飛虱Nlcdc2基因的克隆與序列分析

1、Nlcdc2 RACE PCR及核心片斷的PCR擴增