[發明專利]靶向CLD18A2的T淋巴細胞及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410341504.X
• 申請日: 2014-07-17
• 公開（公告）號: CN105315375B
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 王華茂;宋波;蔡秀梅
• 申請（專利權）人: 愷興生命科技（上海）有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田

本發明涉及靶向CLD18A2的T淋巴細胞及其制備方法和應用。本發明人首次從諸多腫瘤相關基因中成功地找到了一種適用于研制CAR T細胞的靶基因CLD18A2，并成功制備了靶向CLD18A2的CAR T細胞，從而為胰腺癌，胃癌等腫瘤提供一種全新的治療手段。

技術領域

本發明屬于腫瘤細胞治療領域，更具體地，本發明涉及靶向CLD18A2的T淋巴細胞及其制備方法和應用。

背景技術

T淋巴細胞在腫瘤免疫應答中的作用日益受到重視。基于T淋巴細胞的過繼性免疫治療在部分腫瘤中取得了一定的效果，并且該種免疫治療方法可以克服抗體治療的上述缺陷，但在大多數腫瘤的療效仍不能令人滿意[Grupp SA，et al.Adoptive cellulartherapy.Curr Top Microbiol Immunol.,2011；344:149-72.]。近年來，根據CTL對靶細胞的識別特異性依賴于T淋巴細胞受體(T Cell Receptor，TCR)的發現，將針對腫瘤細胞相關抗原的抗體的scFv與T淋巴細胞受體的CD3ζ或FcεRIγ等胞內信號激活基序融合成嵌合抗原受體(Chimeric antigen receptor，CAR)，并將其通過如慢病毒感染等方式基因修飾在T淋巴細胞表面。這種CAR T淋巴細胞能夠以主要組織相容性復合物(MajorHistocompatibility Complex，MHC)非限制性方式選擇性地將T淋巴細胞定向到腫瘤細胞并特異性地殺傷腫瘤。CAR T淋巴細胞是腫瘤免疫治療領域的一個新的免疫治療策略[Schmitz M，et al.Chimeric antigen receptor-engineered T cells forimmunotherapy of Cancer.J Biomed Biotechnol，2010，doi:10.1155/2010/956304.]。

嵌合抗原受體包括胞外結合區，跨膜區和胞內信號區。通常胞外區包含能夠識別腫瘤相關抗原的scFv，跨膜區采用CD8，CD28等分子的跨膜區，胞內信號區采用免疫受體酪氨酸活化基序(ITAM)CD3ζ或FcεRIγ及共刺激信號分子CD28、CD27、CD137、CD134等的胞內信號區。

胞內信號區僅包含ITAM的為第一代CAR T淋巴細胞，其中嵌合抗原受體各部分按如下形式連接：scFv-TM-ITAM。該種CAR T可以激發抗腫瘤的細胞毒性效應，但是細胞因子分泌比較少，并且在體內不能激發持久的抗腫瘤效應[Zhang T.et al.Chimeric NKG2D-modified T cells inhibit systemic T-cell lymphoma growth in a mannerinvolving multiple cytokines and cytotoxic pathways，Can Res2007，67(22):11029-11036.]。

隨后發展的第二代CAR T淋巴細胞加入了CD28或CD137(又名4-1BB)的胞內信號區，其中嵌合抗原受體各部分按如下形式連接：scFv-TM-CD28-ITAM或scFv-TM-/CD137-ITAM。胞內信號區發生的B7/CD28或4-1BBL/CD137共刺激作用引起T淋巴細胞的持續增殖，并能夠提高T淋巴細胞分泌IL-2和IFN-γ等細胞因子的水平，同時提高CAR T在體內的存活周期和抗腫瘤效果[Dotti G.et al.CD28costimulation improves expansion andpersistence of chimeric antigen receptor modified T cells in lymphomapatients.J Clin Invest,2011,121(5):1822-1826.]。