[發明專利]一種造紙廢水的毒性鑒別評價方法

無效

• 申請號: 201410339751.6
• 申請日: 2014-07-16
• 公開（公告）號: CN104062416A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 劉紅玲;李亞兵;陳怡;于紅霞
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: G01N33/18
• 分類號: G01N33/18
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 蔣海軍

1.一種造紙廢水的毒性鑒別評價方法，其步驟為：

(a)毒物特性評價，對造紙廢水進行一系列物理化學處理，通過比較廢水在各種處理前后的毒性變化確定毒物的理化特征，判定毒物類別，測試內容包括8種毒性：初始毒性測試、基線毒性測試、pH調節測試、pH調節/曝氣測試、pH調節/過濾測試、pH調節/過濾/C₁₈SPE測試、EDTA投加測試、Na₂S₂O₃投加測試和梯度pH測試；

(b)毒物鑒別階段，根據毒性特性評價階段毒物特性測試判定出樣品中存在毒物的類別，采用相應的分析技術，并跟蹤樣品在分析過程中的毒性變化，鑒別出導致樣品毒性的可疑毒物；包括以下測試：非極性有機毒物的鑒別測試、極性有機毒物的鑒別測試、揮發性毒物的鑒別測試以及金屬的鑒別測試；

(c)毒物確證階段，根據毒物特性評價階段和毒性鑒別測試結果以及水樣采集情況，選用相關分析方法、可疑毒物投加測試法、質量平衡法或可疑毒物去除測試法確證第二階段鑒別出的可疑毒物是否確為導致樣品毒性的主要毒物。

2.根據權利要求1所述的一種造紙廢水的毒性鑒別評價方法，其特征在于：所述的步驟(a)中毒物特性評價前還包括準備階段，準備好評價方法中所用生物大型溞：保持良好的培養條件，使大型溞的繁殖保持孤雌生殖，選用測試室條件下培養3代以上，大于6小時并且小于24小時齡的新生大型蚤。

3.根據權利要求2所述的一種造紙廢水的毒性鑒別評價方法，其特征在于：所述的步驟(a)中的測試要求為：造紙廢水一經采集，應立即進行常規理化測試和初始急性毒性測試，以減小由于樣品毒性降解而引起的混淆效應，廢水的初始LC50值為第一階段的其它毒性測試提供理想的暴露濃度，也作為初始及基線毒性測試相互區別的參考；其余水樣分別有一組調至pH3和pH11，并進行過濾、曝氣、C18SPE固相萃取，然后，再把處理后的廢水調至原廢水的pHi，并在4℃下保存過夜，第二天，對上述處理廢水的pH進行檢測，準確調至pHi，進行相關毒性測試。

4.根據權利要求3所述的一種造紙廢水的毒性鑒別評價方法，其特征在于：所述的步驟(a)中所述的具體測試分別為：

初始毒性測試：廢水到達測試室當天，立即進行急性毒性測試，每個毒性測試設5個濃度組，1個平行組，暴露水平分別設置為100％、50％、25％、12.5％、6.25％，以便獲得廢水24h LC50值，若在24h時，100％的測試生物死亡率小于50％，廢棄所有水樣，重新采用新鮮水樣，當初始LC50小于25％，第一階段其它毒性測試的最高濃度組是樣品LC50初始濃度的4倍；當初始LC50大于25％，其它毒性測試的最高濃度組為廢水的100％初始濃度；

基線毒性測試：廢水到達第二天，對未經處理的原廢水進行毒性測試，注意存放期間是否發生了明顯的物理變化，暴露水平基于第一天初始毒性的24h LC50，當初始LC50小于25％，第一階段其它毒性測試的最高濃度組是樣品LC50初始濃度的4倍；當初始LC50大于25％，其它毒性測試的最高濃度組為廢水的100％初始濃度，應盡量在同一時間把測試生物放于測試溶液中，便于比較基線毒性測試和特征毒性測試的廢水的毒性。在第一階段初始毒性測試之后進行基線毒性測試，它作為決定由添加特征測試所產生影響的依據，也為廢水毒性降解提供數據，若廢水初始毒性很小，而基線毒性改變很大，則需另采集新鮮廢水；

pH調節測試：取900ml廢水，分別分成3份，300ml一份，其中兩份用NaOH和HCl分別調至pH3和pH11，另外一份保持原來的pH；放置一段時間后，從三份樣品中各取60ml，并將改變了pH值的廢水用NaOH和HCl重新調回原來的pHi，然后第二天取出保存過夜的廢水，檢測pH值是否仍為pHi，如有漂移，再次調節pH值，然后再分別進行急性毒性測試；

pH調節/曝氣測試：取pH3、pHi、pH11的樣品和稀釋水各一份，置于小燒杯中曝氣1h，并不斷監測曝氣過程中樣品pH值的變化，及時調節，以保證樣品pH漂移不超過0.5，將曝氣后的樣品重新調回pHi，然后進行毒性測試，曝氣的稀釋水作為空白對照；

pH調節/過濾測試：取240ml pH3、pHi、pH11廢水分別用孔徑為0.45μm的濾膜過濾，其中各種處理廢水60ml用于過濾毒性測試，剩余用于pH調節/C18固相提取測試；第一天，準備過濾器，然后分別過濾不同pH值的廢水和稀釋水，并收集，然后將各收集液調回pHi，在4℃以下保存過夜，空白對照也要進行過濾處理，第二天進行毒性測試之前，檢查pH3、pH11稀釋水及過濾廢水的pH值是否仍為pHi，如有漂移，再次調節到原來的pH，然后進行毒性測試，在急性毒性測試過程中，至少每24h檢測一次pH，記錄下所有暴露濃度的pH值；

pH調節/C18SPE固相提取測試：新柱子使用前，先用甲醇、二氯甲烷、正己烷及高純水依次沖洗容器及泵，然后用15ml甲醇淋洗柱，過柱液丟棄，再用調至pH3或pH9的高純水淋洗，在第一階段選擇吸附劑量為6ml(100mg)的C18SPE柱，第一天，將30ml不同的稀釋水分別過柱，收集最后的10ml柱后液，并將它們的pH調至pHi，在4℃以下保存過夜，在最后稀釋水過柱時，準備好200ml廢水過柱，在過柱25ml后收集30ml柱后液，過柱150ml后再收集30ml柱后液，兩份收集液均調至pHi，記錄所用酸堿體積，在4℃下保存過夜，第二天，在毒性測試之前，檢查pH3，pH11稀釋水及過濾廢水的pH是否仍未pHi，如有漂移，再次調節到原來的pH，然后進行毒性測試；

Na₂S₂O₃還原測試：將廢水分為三組，每組含三種不同稀釋度的廢水，分別向三組廢水中加入Na₂S₂O₃儲備液，使三組廢水中的Na₂S₂O₃的濃度依次為0.5、0.25、0.125×Na₂S₂O₃的24h LC₅₀，然后分別進行毒性測試；

EDTA螯合測試：EDTA投加測試在水樣到達測試室第二天進行，EDTA的投加有兩種方法：濃度梯度法和稀釋法；濃度梯度法，在100％初始濃度的廢水中依次加入0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125和0.0ml的EDTA儲備液，然后分別放入大型溞，進行毒性測試；稀釋法，將廢水分為三組，每組含有三種不同稀釋度的造紙廢水，分別向三組廢水中加入0.2ml的EDTA儲備液，然后分別進行急性毒性測試；

梯度pH測試：將樣品分別調至pH6、pH7、pH8，然后進行毒性測試。