[發明專利]一種可視化檢測抗原-抗體反應的方法及其應用

有效

• 申請號: 201410338965.1
• 申請日: 2014-07-16
• 公開（公告）號: CN104089950A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 蔣興宇;鮮于運雷;王卓
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/53;G01N33/569
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯桂麗

1.一種可視化檢測抗原-抗體反應的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)抗原抗體反應：將酶標記的抗體加入到包被的待檢測樣品中，充分反應后洗滌去除未反應的酶標記抗體；

(2)酶催化底物反應：向步驟(1)反應體系中加入酶的底物，使酶和底物充分反應；

(3)可視化檢測：向步驟(2)反應體系中加入二價銅離子和表面功能化的金納米粒子，充分反應后根據反應體系顏色的變化判斷樣品中是否發生反應。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)之前還包括對待檢測樣品進行封閉的步驟；

優選地，所述封閉試劑為動物血清；進一步優選地，所述封閉試劑為胎牛血清；

優選地，所述封閉時間為30-120分鐘，封閉溫度為25-40℃；進一步優選地，所述封閉時間為60分鐘；封閉溫度為37℃。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述酶為辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(ALP)，優選為堿性磷酸酶(ALP)；

優選地，所述酶標記的抗體為一抗或二抗；

優選地，所述抗原-抗體反應的孵育時間為30-120分鐘，孵育溫度為25-40℃；進一步優選地，所述孵育時間為60分鐘，孵育溫度為37℃。

4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述酶的底物為磷酸化抗壞血酸、磷酸化檸檬酸、磷酸化抗壞血酸鈉或磷酸化檸檬酸鈉中的任意一種；優選為磷酸化抗壞血酸鈉；

優選地，所述酶的底物濃度為1-500mM，優選為20mM；

優選地，所述酶與底物反應的時間為5-180分鐘，優選為60分鐘。

5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述二價銅離子為硫酸銅、硝酸銅或氯化銅中的任意一種，優選為硫酸銅；

優選地，所述二價銅離子的濃度為0.01-10mM，優選為0.5mM。

6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述加入的表面功能化的金納米粒子為表面炔基功能化的金納米粒子和表面疊氮基功能化的金納米粒子的組合；

優選地，所述表面炔基功能化的金納米粒子的炔基為包含化學式I的化合物：

優選地，所述表面疊氮基功能化的金納米粒子的疊氮基為包含化學式II的化合物：

優選地，所述表面疊氮基功能化的金納米粒子和表面炔基功能化的金納米粒子的摩爾比為1：(0.5-2)，優選為1：1。

7.根據權利要求1-6任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述反應體系的顏色變化在5-30分鐘內出現，優選為10-15分鐘。

8.根據權利要求1-7任一項所述的方法，其特征在于，所述待檢測樣品包括臨床檢測樣品；優選地，所述待檢測樣品為人抗肺炎支原體IgG。

9.根據權利要求1-8任一項所述的方法在生物醫學和/或醫學檢驗中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，將所述方法用于人抗肺炎支原體IgG的可視化檢測。