[發(fā)明專利]植物通過(guò)表達(dá)非哺乳動(dòng)物糖基轉(zhuǎn)移酶而表現(xiàn)出哺乳動(dòng)物類型的糖基化作用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410338812.7
• 申請(qǐng)日: 2008-04-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104195166B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·J·A·勞溫德;D·E·A·弗洛拉克;H·J·博斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 基金會(huì)農(nóng)業(yè)研究服務(wù)中心
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;A01H5/00;C12N5/10;C07K14/00;C07K16/00;C12N9/10;C12N15/54
• 代理公司: 北京戈程知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11314
• 代理人: 程偉,韓文華

1.一種產(chǎn)生能將半乳糖殘基以β1,4-鍵加至N-連接的聚糖上的轉(zhuǎn)基因植物或轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的方法，該方法包含：

(a)將編碼斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的核酸分子插入植物或植物細(xì)胞中；并且

(b)選擇攝入(a)中所述核酸分子并表達(dá)所述核酸分子的轉(zhuǎn)基因植物或轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，從而產(chǎn)生出能將半乳糖殘基以β1,4-鍵加至N-連接的聚糖上的轉(zhuǎn)基因植物或轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶如SEQ?ID?NO:14所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶在其N-末端帶有哺乳動(dòng)物β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的N末端片段延伸，且其中哺乳動(dòng)物β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的N末端片段如SEQ?ID?NO:21所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶如SEQ?ID?NO:16所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶中的胞漿-跨膜-莖區(qū)CTS由來(lái)源于哺乳動(dòng)物唾液酸轉(zhuǎn)移酶的CTS取代，且其中斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶如SEQ?ID?NO:18所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞是轉(zhuǎn)基因煙草或煙草細(xì)胞。

7.一種產(chǎn)生包含一種或多種雜合類型的半乳糖基化N-連接的聚糖的異源糖蛋白的方法，該方法包含：

(a)將編碼斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的第一核酸分子和編碼異源糖蛋白的第二核酸分子插入植物或植物細(xì)胞中，從而產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物或轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞；并且

(b)在適合所述的第一和第二核酸分子表達(dá)的條件下維持所述的轉(zhuǎn)基因植物或轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，從而產(chǎn)生出包含半乳糖基化的N-連接的聚糖的異源糖蛋白。

8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述方法進(jìn)一步包含從轉(zhuǎn)基因植物或轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞中分離異源糖蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中異源糖蛋白選自抗體、疫苗抗原、細(xì)胞因子、激素、酶、細(xì)胞粘附分子和膠原。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶在其N-末端帶有哺乳動(dòng)物β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的N末端片段延伸，且其中哺乳動(dòng)物β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的N末端片段如SEQ?ID?NO:21所示。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶如SEQ?ID?NO:16所示。

12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶中的胞漿-跨膜-莖區(qū)CTS由來(lái)源于哺乳動(dòng)物唾液酸轉(zhuǎn)移酶的CTS取代，且其中斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶如SEQ?ID?NO:18所示。

13.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述植物或植物細(xì)胞是煙草或煙草細(xì)胞。

14.一種編碼多肽的核酸，所述的多肽包括：

(a)斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列，和

(b)其N-末端延伸，其中該延伸是哺乳動(dòng)物β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的N末端片段，且其中該哺乳動(dòng)物β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的N末端片段如SEQ?ID?NO:21所示。

15.根據(jù)權(quán)利要求14的核酸，其中核酸編碼SEQ?ID?NO：16的氨基酸序列。

16.根據(jù)權(quán)利要求14的核酸，其包含SEQ?ID?NO：15的核苷酸序列。

17.編碼斑馬魚(yú)β1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶的核酸，其如SEQ?ID?NO：18所示。

18.根據(jù)權(quán)利要求17的核酸，其包含SEQ?ID?NO：17的核苷酸序列。