[發明專利]一種高效提取深層液態發酵生產烏靈參菌絲體多糖的方法

有效

• 申請號: 201410337722.6
• 申請日: 2014-07-15
• 公開（公告）號: CN104098712A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 王文風;龔勁松;徐國華;徐玲;王英燕;楊亞威;高巖;張芙蓉
• 申請（專利權）人: 江蘇神華藥業有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體是一種高效提取深層液態發酵生產烏靈參菌絲體多糖的方法。

背景技術

烏靈參屬子囊菌綱、炭角菌科的黑柄炭角菌，是一傳統的藥用真菌，學名黑柄炭角菌，別名烏靈參、雞縱(叢)蛋，又名震雷子，生長在地下深處黑翅土棲白蟻廢棄的蟻巢上，被世界藥用真菌研究、應用領域均視為珍稀、名貴藥材，具有廣泛的藥用價值。

野生烏靈參主要產于四川、云南、廣東等地，浙江、江西、江蘇也有生長，烏靈參產地以四川的灌縣、綦扛等地為上品。由于烏靈參生長于地下2米－20米的土棲白蟻廢棄的蟻巢上，采掘非常困難，故自然資源極為稀少。烏靈參既是藥用真菌又是食用菌，有較高營養和藥用價值，是較理想的保健食(藥)品。

烏靈參，性溫、味甘，具有補氣固腎、健脾除濕、鎮靜安神之功效，主治脾虛少食、產后及術后失血過多、產后乳少、胃下垂、疝氣、心悸失眠、小兒驚風及跌打損傷等。實驗研究表明，烏靈參的主要功效成分為多糖，其粗多糖不僅具有提高機體免疫功能和抗衰老作用，而且經中國醫科院藥物研究所對小鼠斷頭缺血喘息時間延長影響測試表明，烏靈參粗多糖有明顯的腦保護作用，并對電休克引起的記憶障礙也有保護作用。中國協和醫科大學基礎所試驗表明，烏靈參粗多糖可明顯抑制小鼠腦內單胺氧化酶活性，從而提高中樞神經遞質功能。

由于烏靈參生長于地下2米－20米的土棲白蟻廢棄的蟻巢上，采掘非常困難，故自然資源極為稀少。目前國內只有少數院校展開深層液態發酵生產烏靈參的研究，都是以獲得烏靈參的菌絲體為主要目標展開研究的，而目前國內關于液態發酵生產烏靈參的功效成分多糖的相關報道很少。目前關于真菌類原料多糖的提取工藝多為傳統的水提醇沉法，即向干燥后的菌絲體加入8-20倍重量的水，控制溫度80-100℃浸泡2-4h，靜止1-2h，然后反復浸提2-3次，然后合并上清液進行濃縮，再用50-85％的酒精進行醇沉，最終烘干即可得到粗多糖。此工藝的缺點是需加入大量水長時間進行浸提，并且為提高收率需反復浸提2-3次，操作周期較長、勞動強度偏大，并且多糖的提取收率多在2-3％，產品成本比較昂貴。并且分離的上清液作為廢液直接棄液排掉，增加了治污成本。

發明內容

本發明的目的是為了解決傳統多糖的水提醇沉的技術瓶頸，采用此發明能夠快速、高效生產出烏靈參多糖。

為了實現上述目的，本發明主要按照下述步驟進行：

一種烏靈參菌絲體多糖的提取方法，該方法包括下述步驟：

1)分離：將烏靈參發酵液經分離，得到烏靈參上清液和濕菌絲體；

2)超聲處理：向步驟1)所得的濕菌絲體中加入步驟1)所得2-5倍的烏靈參上清液進行稀釋，攪拌均勻后進行超聲處理10-40min，得到超聲處理液；上清液的添加主要是作為水溶性溶液來進行提取菌絲體中的多糖，添加量偏少，提取不完全，收率偏低，并且在超聲過程中容易溫度偏高，影響設備使用；若添加過多，后期處理需消耗大量的能源，成本偏高；

3)復合酶解：將步驟2)所得超聲處理液調節pH值為4-7，控制溫度30-70℃，然后向其加入干菌絲體重量0.2-3％的纖維素酶、及干菌絲體重量0.2-3％的蛋白酶，酶解1-3h，得到酶解液；

4)分離、濃縮：將步驟3)所得的酶解液進行分離，將分離所得到的上清液經低溫濃縮得到濃縮比重為1.25～1.40(50℃熱測)的濃縮漿；

5)醇沉、烘干：加入濃縮漿重量3-5倍量的95％酒精，用酒精計檢測混合液酒精度為65-80％(v/v)，靜置2-8h，將沉淀物進行真空烘干；烘干至干燥物水分含量為3～8％，即得菌絲體多糖提取物。

其中，步驟1)、4)所述的分離為離心分離，采用三足離心機或高速離心機等離心設備進行，轉速控制在1500-5000rpm。

步驟2)超聲所用的設備為超聲波細胞粉碎機，其他同等超聲設備均可；超聲的功率為0.5-2.5kw。

步驟3)所述的纖維素酶酶活為15000μ/g～25000μ/g，所述的蛋白酶的單位酶活為47000μ/g～53000μ/g。

步驟4)所述的低溫濃縮過程均要求控制溫度不高于75℃，真空度不低于0.085Mpa。

步驟5)所述的真空烘干的溫度控制在50-75℃，真空度不低于0.085Mpa。

本發明中醇沉次數越多，多糖的含量越高。真空烘干采用的真空干燥箱，本發明提取的多糖含量在30-60％。

本發明具有以下幾個突出的優點：