[發明專利]滇池金線鲃胱抑素基因及其應用

有效

• 申請號: 201410335924.7
• 申請日: 2014-07-15
• 公開（公告）號: CN104098690A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 潘曉賦;宋玉竹;張遠旭;楊君興;劉銳;劉倩
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明動物研究所
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C12N15/15
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

技術領域：

本發明提供一種滇池金線鲃胱抑素基因及其應用，屬于生物醫學技術領域。?

背景技術：

滇池金線鲃Sinocyclocheilus?grahami，俗稱金線魚，也被稱為菠羅魚、洞魚，屬于鯉形目鯉科鲃亞科金線鲃屬。滇池金線鲃為云南特有高原珍稀半洞穴中小型冷水性魚類，僅分布于滇池及其周邊的溶洞、涌泉和溪流中，其成年個體重一般為30～80g，曾是產區重要的經濟魚種。其肉可入藥，有滋陰調元，暖腎填精的功效，主治虛老損傷、腎虛滑精等癥。?

在腫瘤發生發展的過程中，組織蛋白酶B起著重要的作用，組織蛋白酶B能夠直接降解或激活纖溶酶原激活劑及基質金屬蛋白酶等而間接降解許多細胞外基質成分，從而參與腫瘤的侵襲轉移過程。此外它還可以促進腫瘤血管的增生，增強腫瘤細胞的運動能力，而且組織蛋白酶B轉錄、表達水平的高低與腫瘤的預后呈正相關。目前認為對組織蛋白酶B等半胱氨酸蛋白酶的抑制與抗腫瘤作用有關。?

將本發明的滇池金線鲃胱抑素氨基酸全序列及其編碼基因分別對蛋白質數據庫和基因數據庫進行了比對搜索，均未發現有任何相同序列信息。?

發明內容：

本發明的目的在于提供一種滇池金線鲃胱抑素，該滇池金線鲃胱抑素是一種單鏈多肽，理論分子量13850.80道爾頓，等電點7.76，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。?

本發明另一目的是提供一種編碼所述滇池金線鲃胱抑素的基因，該滇池金線鲃胱抑素的基因由SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列組成。?

滇池金線鲃胱抑素基因的克隆方法如下：?

滇池金線鲃皮膚總RNA提取、反轉錄及設計引物并利用PCR方法篩選滇池金線鲃胱抑素基因，其中正向擴增引物長度為22個核苷酸，序列為5’–CAGCCGGCAGCCATGGACATCT-3’，反向擴增引物長度為22個核苷酸，序列?為5’-GTGAAATTAAGCGGATCTTCTG-3’，二者均基于EST測序數據設計(數據未發表)；所獲陽性單克隆進行基因核苷酸序列測定，基因測序結果表明編碼滇池金線鲃胱抑素的基因由435個核苷酸組成，自5’端至3’端序列(SEQ?ID?NO:1)為：?

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編碼滇池金線鲃成熟胱抑素為第61–432位核苷酸，其氨基酸序列(SEQ?ID?NO:2)為：?

滇池金線鲃胱抑素的原核表達、純化方法如下：?

構建原核表達載體，轉化入BL21感受態細胞，培養于含氨芐青霉素的LB培養基中，經IPTG誘導表達后，離心收集菌體，超聲破碎離心取上清，進行親和層析獲得融合滇池金線鲃胱抑素；經超濾后用腸激酶進行消化后，純化即得重組滇池金線鲃胱抑素，該胱抑素具有強烈的抑制組織蛋白酶B活性。?

本發明另一目的是將滇池金線鲃胱抑素應用在制備組織蛋白酶B抑制劑中。?

本發明中所用滇池金線鲃來源于中國科學院昆明動物研究所，為人工繁育。?

本發明的有益效果在于:?