[發明專利]一種適合BHK-21細胞轉瓶培養的低血清培養基及其配制方法有效
| 申請號： | 201410334965.4 | 申請日： | 2014-07-15 |
| 公開（公告）號： | CN105255812B | 公開（公告）日： | 2019-03-12 |
| 發明（設計）人： | 趙峻嶺 | 申請（專利權）人： | 內蒙古金源康生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京中海智圣知識產權代理有限公司 11282 | 代理人： | 李大為 |
| 地址： | 010070 內蒙古自治*** | 國省代碼： | 內蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 培養基 血清 轉瓶 低血清培養基 水解物 脂類 配制 細胞 病原菌污染 動物源蛋白 貼壁培養 細胞產品 細胞生長 血清用量 重組蛋白 微量元素 常規的 動物源 添加量 減小 外源 酵母 激素 蛋白 攜帶 替代 | ||
1.一種適合BHK-21細胞轉瓶培養的低血清培養基，其特征在于，其培養基在常規培養基的基礎上，添加了激素、脂類、微量元素和水解物成分，用以替代血清的部分功能，用于降低血清的添加量至添加的血清體積比為1％，添加成分及含量如下：
亞硒酸鈉0.005-0.03mg/L；
氫化可的松0.01-0.1mg/L；
前列腺素0.01-0.1mg/L；
三碘甲狀腺原氨酸0.001-0.01mg/L；
亞油酸0.1-0.3mg/L；
大豆卵磷脂15-20mg/L；
膽固醇3-10mg/L；
腐胺0.04-0.8mg/L；
乙醇胺1-20mg/L；
棉籽水解物300-3000mg/L；
大米水解物300-3000mg/L；
麥麩水解物300-3000mg/L；
丙酮酸鈉50-300mg/L；
重組胰島素2-25mg/L；
檸檬酸鐵0.05-1mg/L；
環庚三烯酚酮0.1-6mg/L；
F-68100-600mg/L；
還原型谷胱甘肽0.04-0.5mg/L。
2.如權利要求1所述的適合BHK-21細胞轉瓶培養的低血清培養基，其特征在于，所述的常規培養基為DMEM培養基，編號為P0240。
3.一種權利要求1所述適合BHK-21細胞轉瓶培養的低血清培養基的配制方法，其特征在于，所述配制方法包括如下步驟：
步驟1：在容器中加注射用水至總體積的90％，將DMEM培養基全部倒入容器中，用注射用水將袋內殘留培養基洗下并倒入容器，輕微攪拌溶解；
步驟2：將權利要求1所述添加成分，以及體積比為1％的血清依次加入到溶液中，輕微攪拌溶解；
步驟3：輕微攪拌至完全溶解，加注射用水定容至總體積的100％；
步驟4：用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調節pH至7.2；
步驟5：用0.2μm孔徑的濾膜正壓過濾除菌；
步驟6：溶液配制完成后在2℃～8℃下密閉避光保存。
4.如權利要求3所述的適合BHK-21細胞轉瓶培養的低血清培養基的配制方法，其特征在于，所述步驟1中注射用水的水溫為25℃。
5.如權利要求3所述的適合BHK-21細胞轉瓶培養的低血清培養基的配制方法，其特征在于，所述DMEM培養基的用量為200ml。
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