[發明專利]HBV長爪沙鼠感染模型的構建方法

在審

• 申請號: 201410334924.5
• 申請日: 2014-07-15
• 公開（公告）號: CN105287645A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 佘銳萍;趙月;毛晶晶;王銅銅;楊依霏;石蕊寒
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: A61K35/76
• 分類號: A61K35/76;A61K49/00;A61K35/16;A61P1/16;A61P31/20
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及HBV長爪沙鼠感染模型的構建方法。

背景技術

乙型肝炎(HB)是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一種以肝臟損傷為主要特征的嚴重危害人類和動物健康的傳染病之一。由于HBV具有嚴格的宿主特異性，因而缺乏理想的細胞模型或動物模型，從而阻礙了HBV的研究。

目前，用于乙型肝炎研究的實驗動物模型主要是靈長類動物或轉基因動物，因其價格高、技術難度大，耗時、費力，穩定性較差等不能夠得到廣泛使用。長期以來，建立生物學背景清晰、簡單易得、經濟實用的HBV實驗動物模型一直是人們所研究的方向。

發明內容

本發明的目的是提供一種構建HBV動物感染模型的方法。

本發明提供的方法，包括如下步驟：用離體大三陽陽性HBV感染血清攻毒動物，得到HBV動物感染模型。

上述方法中，所述離體大三陽陽性HBV感染血清為人源離體大三陽陽性HBV感染血清。

上述方法中，所述動物為鼠，具體為長爪沙鼠；上述動物也可以采用其他嚙齒目或其他鼠科動物或其他沙鼠屬動物替代。

上述方法中，所述攻毒為連續攻毒3天，每天每只攻毒1次，每次攻毒劑量為0.2ml。上述攻毒的方式采用腿部股靜脈注射。

上述的方法在設計、制備或篩選HBV藥物或疫苗中的應用也是本發明保護的范圍。

離體的HBV感染的大三陽陽性血清在制備構建HBV動物感染模型的試劑盒中的應用也是本發明保護的范圍。

本發明的實驗證明，由于長爪沙鼠感染模型具有價格低廉、來源豐富、飼養管理方便、操作容易、可重復性強等優勢，是HBV感染的首選實驗動物，因此，用長爪沙鼠用于HBV感染模型，所取得的研究結果將更加系統、全面、可靠，更具有說服力；發明使用人源HBV血清對長爪沙鼠進行感染試驗，可在攻毒后沙鼠肝臟和腎臟中檢測到HBVDNA的存在，ELISA方法也可檢測到相應的抗原和抗體，應用人源HBV感染沙鼠，建立了可廣泛推廣使用的價格低廉，飼養簡單、操作方便的HBV長爪沙鼠感染模型，避免了目前使用的靈長類動物和轉基因動物價格昂貴、來源有限、重復性差、實驗要求條件高等不足，構建得到的模型為研究HBV致病機理、種間傳播機制、藥物篩選以及疫苗研發等提供了理想的感染模型。

附圖說明

圖1為沙鼠組織中HBV的DNA的檢測

圖2為HBV感染沙鼠組織病理學觀察

圖3為HBV感染沙鼠超微病理學觀察

圖4為HBV感染沙鼠組免疫組織化學觀察

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。

實施例1、HBV長爪沙鼠感染模型的構建

一、HBV長爪沙鼠感染模型構建

1、試驗長爪沙鼠

選取40只清潔級體重50-80g雄性長爪沙鼠(購自首都醫科大學)。HBVELISA試劑盒進行檢測，淘汰HBV陽性沙鼠。

分為試驗組22只，對照組18只，隔離系統單獨飼養。

2、攻毒

試驗組沙鼠麻醉后，通過腿部股靜脈注射人源離體大三陽陽性HBV感染血清(湖北省宜城中心醫院，患者知情)，連續攻毒3d，正常飼養得到HBV長爪沙鼠感染模型。

上述攻毒方式為每天每只注射1次，每只注射劑量為0.2ml/次，

對照組沙鼠麻醉后采用同樣的方法注射相同體積的生理鹽水，得到對照組處理后沙鼠。

二、HBV長爪沙鼠感染模型的驗證

1、樣品收集

分別于攻毒后1天(第三次攻毒時間記作第0天)、2天、3天、1周、2周、4周、8周選取上述試驗組攻毒后沙鼠和對照組處理后沙鼠麻醉后進行心臟采血并剖殺，取各臟器用2.5％戊二醛-多聚甲醛固定液進行固定。另取肝臟、腎臟、腦和唾液腺等組織樣品于—80℃凍存用于后續試驗，肝臟凍存組織選取含有膽囊部分。

分別于攻毒后1天、3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周采集未剖殺沙鼠糞便進行檢測。同時，攻毒后1天、2天、3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周對未剖殺沙鼠進行斷尾采血，收集血清進行ELISA乙肝五項檢測。

2、ELISA乙肝五項檢測