[發明專利]一種豇豆抗枯萎病的苗期鑒定方法

有效

• 申請號: 201410334010.9
• 申請日: 2014-07-15
• 公開（公告）號: CN104160846A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 吳仁鋒;楊紹麗
• 申請（專利權）人: 武漢市蔬菜科學研究所
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01C1/00;A01G7/00;C12N1/14;C12R1/77
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

技術領域

本發明屬于園藝作物抗病性鑒定技術領域，具體涉及一種豇豆抗枯萎病的苗期鑒定方法，與作物抗病育種中抗性材料的早期快速鑒定技術領域有關。

背景技術

豇豆(學名Vigna?unguiculata)俗稱角豆、姜豆、帶豆、掛豆角，屬于豆科一年生植物，主要產于熱帶、亞熱帶和溫帶地區。豇豆在我國栽培歷史悠久，種植分布面積廣，除青海和西藏外，全國各省市區均有種植。近年來，我國豇豆種植面積維持在33萬公頃以上。河北、河南、江蘇、浙江、安徽、四川、重慶、湖北、湖南、廣西等地每年栽培面積超過1萬公頃，并形成了浙江麗水、江西豐城、湖北雙柳等面積超過1000公頃的大型專業化豇豆生產基地。一般以春夏栽培為主，其次是秋季栽培。由于豇豆生長于高溫濕熱的環境，易誘發豇豆枯萎病的發生。

豇豆枯萎病菌(Fusarium?oxysporum?Schl.)以菌絲體和厚垣孢子隨病殘體遺落在土中越冬(種子也能帶菌)，能在土中營長時間的腐生生活。病菌借助灌溉水、農具、施肥等傳播，從傷口或根冠部侵入，在維管束組織的導管中繁殖，并向上擴展。豇豆枯萎病多數從開花期開始，結莢盛期可造成植株大量枯死。初期病株下部葉片先變黃，逐漸向上發展，病葉葉脈變褐，近脈的葉肉組織變黃，終致葉片干枯、脫落，病株易被拔起。檢視根部及莖基部，根部變褐腐爛，根莖維管束變紅褐色至黑褐色。嚴重危害時，全田植株死亡，僅剩枯藤一片，相當觸目。

培育抗病品種是防治豇豆枯萎病的重要方法之一，抗性資源的獲得對于抗病育種意義重大，客觀、快速地評價豇豆品種枯萎病抗性的強弱是豇豆抗枯萎病育種過程中最基礎、最重要的環節。目前豇豆枯萎病抗性鑒定主要是通過人工病圃鑒定和室內苗期鑒定。人工病圃鑒定被認為是最接近自然實際，最為可靠的抗性鑒定方法，在抗病育種過程中應用最為普遍。但此鑒定方法過于依賴自然發病條件，如果環境條件不適合發病或者病圃病菌分布不均勻，容易造成抗性誤判，歷時太長，且具有較強的季節性。豇豆苗期鑒定方法簡便、迅速、容易控制外界環境條件。常用的方法為，剪根幼苗浸根法(方木壬等.豇豆枯萎病抗原篩選研究，華南農業大學學報，1984，5(4)：57-61.)、胚根法(張衍榮等.豇豆枯萎病抗病性鑒定技術研究，華南農業大學學報，2005，26(3)：22-25.)。其中胚根法發芽率與成苗生長勢的差異常造成結果不一致，不能準確反映苗期的抗性，并且胚根接種到苗期顯癥的周期比較長。剪根幼苗浸根法，雖然周期較短，簡便可行，但剪根長短易不均勻，且剪根費時費力。兩種鑒定方法均有一定的缺點，這是造成苗期鑒定結果與人工病圃鑒定存在顯著差異的原因之一。因此探索一套發病迅速、育苗時間短、管理簡便、適合大批量育種材料的豇豆枯萎病抗性快速鑒定方法對于評價豇豆種植材料的抗病性、培育抗病新品種、進行合理品種布局具有重要意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種豇豆抗枯萎病的苗期接種鑒定方法。該方法簡便易行，所需設備較少，結果可靠，能較為準確地反映不同豇豆品種對枯萎病的抗性表現。

實現本發明的技術方案為：

一種豇豆抗枯萎病的苗期接種鑒定方法，包括以下步驟：

A、豇豆種子催芽：

選擇市售和常用栽培的豇豆品種作為鑒定對象；

挑選籽粒飽滿的豇豆品種種子，用紗布包好，在55℃恒溫水浴鍋中溫湯浸種2小時，進行種子消毒，再將種子放在鋪有吸水紙的培養皿中，最后33℃恒溫處理，直至得到萌發種子。

B、播種與幼苗培育：

將萌發的種子播種于育苗基質(簡稱基質，配方見后)，進行培養，得到二葉一心的幼苗。

C、豇豆枯萎病菌孢子懸浮液的制備：

a.選擇豇豆枯萎病田間典型病株，在發病植株莖基部病健交界處切取2mm×2mm組織，用無菌水沖洗干凈；

b.對上述組織進行消毒處理，用70％酒精消毒0.5min，再用0.1％的升汞溶液消毒0.5-1min，然后用無菌水沖洗3次，每次1min，得到消毒處理后的病組織；

c.將消毒處理后的病組織接入PDA平板上，置25℃恒溫條件下培養；

d.當接種后的PDA平板培養基的表面即植物病組織周圍長出菌落后，將該菌落轉入PDA斜面培養基中(在4℃冰箱內貯存備用，或可長期應用)，篩選得到鑒定豇豆枯萎病的指示菌即豇豆枯萎病菌JWS-1，Fusarium?oxysporum?Schl.JWS-1，于2014年7月3日送中國.武漢.武漢大學中國典型培養物保藏中心保藏，其保藏號為CCTCC?NO：M2014314；